Биология. Биологические системы и процессы. 11 класс. Профильный уровень. Учебник / Теремов А.В., Петросова Р.А. -М., 2012. -400 с.
Учебник 11 класса Теремова, Петросовой по биологии разработан для изучения предмета на профильном уровне. Содержит биологические знания, необходимые для формирования представлений об организации живого на биосферном, популяционно-видовом, биогеоценотическом уровнях.-Содержание-
ВВЕДЕНИЕ 4
ИСТОРИЯ ЭВОЛЮЦИОННОГО УЧЕНИЯ 05
Зарождение эволюционных представлений 05
Первые эволюционные концепции 11
Предпосылки возникновения дарвинизма. … 15
Эволюция культурных форм… 19
Эволюция видов.. 22
Развитие эволюционной теории Дарвина 29
МИКРОЭВОЛЮЦИЯ 34
Генетические основы эволюции 35
Движущие силы эволюции 38
Естественный отбор 46
Формы естественного отбора 51
Приспособленность организмов 55
Вид, его критерии… 60
Видообразование 64
МАКРОЭВОЛЮЦИЯ 71
Палеонтологические биогеографические методы … 71
Эмбриологические сравнительно-морфологические … 79
Молекулярно-биохимические, генетические ….
Направления пути эволюции 91
Формы направленной эволюции 99
Общие закономерности эволюции 102
ВОЗНИКНОВЕНИЕ — РАЗВИТИЕ ЖИЗНИ … 107
Гипотезы теории возникновения жизни… 107
Основные этапы неорганической… 112
Начало органической эволюции 118
Формирование надцарств организмов 123
Основные этапы эволюции раст. мира 127
Основные этапы эволюции живот. мира 136
История Земли .. 144
Развитие жизни ….149
Современная система органического .. 164
ЧЕЛОВЕК — БИОСОЦИАЛЬНАЯ СИСТЕМА 174
Антропология — наука человеке 173
Становление представлений происхождении человека 177
Сходство человека животными 181
Движущие силы антропогенеза 190
Основные стадии антропогенеза 194
Эволюция современного человека 204
Человеческие расы 206
Приспособленность человека ..212
Человек- часть природы — общества 215
ЭКОЛОГИЯ -… 221
Зарождение развитие экологии 221
Методы экологии 225
ОРГАНИЗМЫ СРЕДА ОБИТАНИЯ 232
Среды обитания организмов 233
Экологические факторы …236
Свет — экологический фактор 240
Температура — экологический фактор 246
Влажность — экологический фактор 252
Газовый — ионный состав среды.
… 258Жизненные формы организмов 268
Биотические взаимодействия. Конкуренция. … 273
Мутуализм. Комменсализм. Аменсализм. … 279
ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВИДА … 284
Экологическая ниша вида 285
Экологические характеристики популяции 290
Экологическая структура популяции 295
Динамика популяции … 300
СООБЩЕСТВА ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ 305
Сообщества организмов: … 305
Экосистемы. Круговорот веществ….312
Основные показатели экосистем 319
Свойства биогеоценозов … 323
Природные экосистемы 327
Антропогенные экосистемы 332
Биоразнообразие — основа устойчивости…337
БИОСФЕРА — ГЛОБАЛЬНАЯ ЭКОСИСТЕМА 344
Закономерности существования биосферы 350
Основные биомы Земли 354
ЧЕЛОВЕК ОКРУЖАЮЩАЯ СРЕДА 360
Человечество биосфере Земли 360
Загрязнение воздушной среды. .. 364
Загрязнение водной среды. … 368
Разрушение почвы … 372
Антропогенное воздействие … 378
Охрана растительного — животного мира 382
Рациональное природопользование … 389
Сосуществование человечества природы 393
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 399
Размер файла: 62 Мб; Формат: pdf/
Вместе с «учебником 11 класса профильного уровня Биологические системы — процессы Теремова, Петросова по биологии » скачивают:
ГДЗ по Биологии 11 класс Теремов
Авторы: Теремов А.В., Петросова Р.А..
ГДЗ по биологии 11 класс Теремов помогает многим школьникам преодолеть трудности, возникающие с освоением биологии. Казалось бы, что такого сложного в этом предмете? Все, что изучает эта наука знакомо нам по повседневной жизни, и хоть какие-то представления в той или иной степени о происходящих процессах есть у каждого. Однако не всем учащимся оказывается под силу углубить свои познания, не говоря уже о том, чтобы вывести их на новый уровень. А осваивать в этом году придется действительно много:
- история эволюционного учения;
- макро и микроэволюция;
- возникновение и развитие жизни на Земле;
- человек – биосоциальная система;
- экология.
Это еще далеко не все темы. Что-то дается ребятам более легко, а некоторый материал никак не хочет укладываться в голове.
Поэтому помимо внимательного отношения к данной дисциплине, необходимо иметь надежное подспорье для разбора сложных тем. И им станет данный решебник, в котором можно найти все необходимое для успешной учебы.
ГДЗ по биологии за 11 класс Теремова – помощь в сложных ситуациях
- понять ошибочность своих суждений;
- запомнить верную и актуальную информацию;
- сократить время на выполнение д/з.
Сборник может существенно упростить подготовку к различным проверочным работам, ведь все необходимые сведения собраны в одном пособии и повторить их не составит никакого труда.
Изучение биологии школьники довольно часто не воспринимают всерьез, так как считают, что данный предмет им не пригодится.
Помочь учащимся в освоении программы этого учебного года может решебник по биологии для 11 класса (авторы: Теремов А. В., Петросова Р. А.). Процесс обучения уже не будет казаться таким сложным, ведь подростки всегда смогут найти всю необходимую информацию и восполнить пробелы в образовании.
Биология. 11 класс. Биологические системы и процессы. Профильный уровень
Название: Биология. 11 класс. Биологические системы и процессы. Профильный уровеньАвтор: Теремов А.В., Петросова Р.А.
Год: 2012
Формат: pdf
Страниц: 400
Размер: 97 мб
Язык: русский
Учебник предназначен для изучения предмета «Биология» в 11 классе на профильном уровне.
Материал учебника раскрывает содержание биологических знаний, необходимых для формирования представлений о структурно-функциональной организации живого на популяционно-видовом, биогеоценотическом (экосистемном) и биосферном уровнях. С целью обеспечения подготовки к сдаче ЕГЭ по биологии в учебник включены сведения не только обобщающего раздела «Общая биология», но и из разделов «Растения. Бактерии. Грибы. Лишайники», «Животные», «Человек и его здоровье».
ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА 1. ИСТОРИЯ ЭВОЛЮЦИОННОГО УЧЕНИЯ
§ 1. Зарождение эволюционных представлений 5
§2. Первые эволюционные концепции 10
§3. Предпосылки возникновения дарвинизма. Научная деятельность Ч. Дарвина 15
§4. Эволюция культурных форм организмов (по Ч. Дарвину) 19
§5. Эволюция видов в природе (по Ч. Дарвину) 22
§6. Развитие эволюционной теории Ч. Дарвина 29
ГЛАВА 2. МИКРОЭВОЛЮЦИЯ
§7. Генетические основы эволюции 34
§8. Движущие силы (факторы) эволюции 38
§9. Естественный отбор 46
§10.
Формы естественного отбора 50
§11. Приспособленность организмов 55
§12. Вид, его критерии и структура 60
§13. Видообразование 64
ГЛАВА 3. МАКРОЭВОЛЮЦИЯ
§14. Палеонтологические и биогеографические методы изучения эволюции 71
§15. Эмбриологические и сравнительно-морфологические методы изучения эволюции 79
§ 16. Молекулярно-биохимические, генетические и математические методы изучения эволюции 86
§17. Направления и пути эволюции 91
§18. Формы направленной эволюции 98
§19. Общие закономерности (правила) эволюции 102
ГЛАВА 4. ВОЗНИКНОВЕНИЕ И РАЗВИТИЕ ЖИЗНИ НА ЗЕМЛЕ
§20. Гипотезы и теории возникновения жизни на Земле 107
§21. Основные этапы неорганической эволюции 112
§22. Начало органической эволюции 117
§23. Формирование надцарств организмов 122
§24. Основные этапы эволюции растительного мира 127
§25. Основные этапы эволюции животного мира 135
§26. История Земли и методы её изучения 144
§27. Развитие жизни в архее и протерозое 149
§28.
Развитие жизни в палеозое 152
§29. Развитие жизни в мезозое и кайнозое 158
§30. Современная система органического мира 164
ГЛАВА 5. ЧЕЛОВЕК — БИОСОЦИАЛЬНАЯ СИСТЕМА
§31. Антропология — наука о человеке 173
§ 32. Становление представлений о происхождении человека 177
§33. Сходство человека с животными 181
§34. Отличия человека от животных 186
§35. Движущие силы (факторы) антропогенеза 190
§36. Основные стадии антропогенеза 193
§37. Эволюция современного человека 203
§38. Человеческие расы 206
§ 39. Приспособленность человека к разным условиям среды 212
§40. Человек как часть природы и общества 215
ГЛАВА 6. ЭКОЛОГИЯ — НАУКА О НАДОРГАНИЗМЕННЫХ СИСТЕМАХ
§41. Зарождение и развитие экологии 221
§42. Методы экологии 225
ГЛАВА 7. ОРГАНИЗМЫ И СРЕДА ОБИТАНИЯ
§43. Среды обитания организмов 232
§44. Экологические факторы и закономерности их действия 236
§45. Свет как экологический фактор 240
§46.
Температура как экологический фактор 246
§47. Влажность как экологический фактор 252
§48. Газовый и ионный состав среды. Почва и рельеф. Погодные и климатические факторы 258
§49. Биологические ритмы. Приспособления организмов к сезонным изменениям условий среды 263
§50. Жизненные формы организмов 267
§51. Биотические взаимодействия. Конкуренция. Хищничество. Паразитизм 273
§52. Мутуализм. Комменсализм. Аменсализм. Нейтрализм 279
ГЛАВА 8. ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВИДА И ПОПУЛЯЦИИ
§53. Экологическая ниша вида 284
§54. Экологические характеристики популяции 289
§55. Экологическая структура популяции 294
§56. Динамика популяции и её регуляция 300
ГЛАВА 9. СООБЩЕСТВА И ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ
§57. Сообщества организмов: структуры и связи 305
§58. Экосистемы. Круговорот веществ и поток энергии 312
§59. Основные показатели экосистем 318
§60. Свойства биогеоценозов и динамика сообществ 323
§61. Природные экосистемы 327
§62.
Антропогенные экосистемы 332
§63. Биоразнообразие — основа устойчивости сообществ 337
ГЛАВА 10. БИОСФЕРА — ГЛОБАЛЬНАЯ ЭКОСИСТЕМА
§64. Биосфера — живая оболочка Земли 343
§65. Закономерности существования биосферы 349
§66. Основные биомы Земли 353
ГЛАВА 11. ЧЕЛОВЕК И ОКРУЖАЮЩАЯ СРЕДА
§67. Человечество в биосфере Земли 360
§68. Загрязнение воздушной среды. Охрана воздуха 364
§69. Загрязнение водной среды. Охрана водных ресурсов 368
§70. Разрушение почвы и изменение климата. Охрана почвенных ресурсов и защита климата 372
§71. Антропогенное воздействие на растительный и животный мир 378
§72. Охрана растительного и животного мира 382
§73. Рациональное природопользование и устойчивое развитие 389
§74. Сосуществование человечества и природы 392
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 398
Новые учебники и учебные пособия по биологии
Издательский дом «Мнемозина» выпустил новые учебные пособия для учителей и учащихся.• Державина Т.
Б. Экскурсии в природу. Пособие для учителя
Книга адресована учителям биологии средних школ. Она посвящена организации экскурсий с учащимися в природные биоценозы – лес, луг, водоем, а также в городские скверы, парки, на пришкольные участки. В описаниях экскурсий приводится множество разнообразных фактов о растениях и животных, рассказывается о методах исследования живой и неживой природы. Книга содержит богатый иллюстративный материал.
• Суматохин С.В. Биология. Животные. 7 класс. Рабочая тетрадь
Рабочая тетрадь является приложением к учебнику Д.И. Трайтака, С.В. Суматохина «Биология. Животные. 7 класс» (М.: Мнемозина). Содержание тетради имеет эколого-практическую направленность. В неё включены вопросы на проверку знаний базового уровня, творческие задания и биологические задачи. Большинство заданий оформлено в форме таблиц, схем, рисунков, кроссвордов. Самостоятельная работа учащихся с тетрадью будет способствовать усвоению, закреплению и систематизации знаний, полученных на уроках биологии.
• Теремов А.В., Петросова Р.А. Биология. 10 класс. Учебник
Структура учебника построена на основе концентрического подхода к изучению предмета, при котором сведения о биологических системах и процессах формируются на базе знаний, приобретенных учащимися при изучении соответствующих разделов курса биологии основной школы. Учитывая, что учащиеся старшей школы уже имеют начальную общебиологическую подготовку, в материал учебника включены сведения, дополняющие и развивающие их знания о живой природе как форме движения материи, способствующие формированию естественнонаучной картины мира. С целью обеспечения подготовки к сдачи ЕГЭ по биологии в учебник включены сведения не только из обобщающих разделов 9, 10–11 классов, но из разделов «Растения. Бактерии, грибы и лишайники» 6 класса, «Животные» 7 класса, «Человек и его здоровье» 8 класса.
• Теремов А.В., Петросова Р.А. Биология. 11 класс. Учебник
Учебник предназначен для учащихся старшей школы, изучающих биологию на профильном уровне.
Подробно рассмотрены наиболее характерные для биологических систем особенности (открытость, саморегуляция, самоорганизация, самовоспроизводство и др.), а также методы познания живой природы, исторического развития органического мира, закономерностей существования экосистем и биосферы. Особое внимание в содержании учебника уделено сведениям, касающимся закономерностей коэволюции природы и общества, принципов устойчивого развития, сохранения биоразнообразия планеты, формирования экологизированного сознания современного человека. Текст учебника двухуровневый, предусматривающий изучение биологии в разных объемах. Дополнительный текст содержит биологические сведения, призванные пробудить у учащихся интерес к предмету, способные ориентировать старшеклассников на выбор профессий, связанных с биологией.
Экскурсии в природу. Пособие для учителя
Биология. Животные. 7 класс. Рабочая тетрадь
Биология. 10 класс. Учебник
Биология. 11 класс. Учебник
2-122 Германия 5 рейхспфеннигов 1938D г. 200.00 р. Москва 60.00 р Продавец: Alex7778887 (5930) |
1 копейка 2014 м + 5 копеек 2014 м Россия мешковые UNC НАБОР 2 шт для Крыма !!! 1.00 р. 0 ставок Саки Окончание торгов: 2 дня Продавец: USSR1917 (1137) |
1 копейка 2014 м + 5 копеек 2014 м Россия мешковые UNC НАБОР 2 шт для Крыма !!! 1.00 р. 0 ставок Саки 90.00 р Окончание торгов: 1 день Продавец: USSR1917 (1137) |
0.91КТ 8.55X4.4ММ ГРЕТЫЙ НЕЛЕЧЕНЫЙ РУБИН МАРКИЗА 4276.80 р. Москва 10. Окончание торгов: 23/06 16:09 Продавец: dvp1974 (5310) |
1 рупия 1999 год — Индия — KM#92.2 — Д83-9 8.00 р. Зеленоград 80.00 р Окончание торгов: 15/08 15:50 Продавец: Dontor_2m (1382) |
10 пфеннигов Германия 3- Рейх (буква A, лот № 5) 1942 год 40.00 р. Торг уместен Москва Продавец: оldсity49 (19176) |
1 рубль 2016 ММД. Брак, разворот аверса 10-11 град. 10.00 р. 0 ставок Санкт-Петербург 80.00 р Окончание торгов: 25/06 21:39 Продавец: petrpaulSPb (1742) |
3 копейки 1930 год — Россия — СССР — Y#93 — Д10-11 9. Зеленоград 80.00 р Окончание торгов: 15/08 15:49 Продавец: Dontor_2m (1382) |
5 сукре 1988 год (10.11.1988) IC № 07964400 UNC 210.00 р. Озерск 115.00 р Продавец: monarch (4409) |
0,12Ct БРИЛЛИАНТ Натуральный! Серый 3,1мм 46.00$ Пермь договорная Продавец: Gesyscom (356) |
1 копейка 2014 м + 5 копеек 2014 м Россия мешковые UNC НАБОР 2 шт для Крыма !!! + БОНУС 55.00 р. Саки 80. Окончание торгов: 23/07 14:32 Продавец: USSR1917 (1137) |
1 копейка 2014 м + 5 копеек 2014 м Россия мешковые UNC НАБОР 2 шт для Крыма !!! 1.00 р. 0 ставок Саки 90.00 р Окончание торгов: 2 дня Продавец: USSR1917 (1137) |
1 копейка 2014 м + 5 копеек 2014 м Россия мешковые UNC НАБОР 2 шт для Крыма !!! 1.00 р. 0 ставок Саки 90.00 р Окончание торгов: 23 часа Продавец: USSR1917 (1137) |
1 копейка 2014 м + 5 копеек 2014 м Россия мешковые UNC НАБОР 2 шт для Крыма !!! 0.01 р. 0 ставок Саки 90. Окончание торгов: 5 часов Продавец: USSR1917 (1137) |
1 копейка 2014 м + 5 копеек 2014 м Россия мешковые UNC НАБОР 2 шт для Крыма !!! 14.50 р. Саки 90.00 р Окончание торгов: 19/07 16:29 Продавец: USSR1917 (1137) |
Сент-Киттс и Невис: 2d SG 71a (1941), MH OG VF, £ 55 и 2d SG 71b (1943), MH OG VF, £ 1,25 720.00 р. Санкт-Петербург 80.00 р Окончание торгов: 05/08 15:47 Продавец: zea102 (5564) |
т1 2 Телеграмма марта M91b8cb78 100.00 р. 0 ставок 150.00 р. блиц-цена Ейск 150. Окончание торгов: 1 день Продавец: tstst23 (2648) |
Эквадор 10 сукре 1991 KM# 92.2 10 SUCRES (Diez) 7A-37 50.00 р. Мытищи 100.00 р Продавец: MixaLыч (11164) |
Эквадор 10 сукре 1991 KM# 92.2 10 SUCRES (Diez) 7A-38 50.00 р. Мытищи 100.00 р Продавец: MixaLыч (11164) |
Эквадор 10 сукре 1991 KM# 92.2 10 SUCRES (Diez) 7A-39 50.00 р. Мытищи 100.00 р Продавец: MixaLыч (11164) |
Журнал КРУГОЗОР №№ 2,5,6, 7,10,11,12за 1981 год 7 Журналов одним лотом! 700.00 р. 0 ставок 1000.00 р. блиц-цена Лакинск 500.00 р Окончание торгов: 20/06 14:57 Продавец: Питон43 (1267) |
Моршанск Пиво Купец 2 0,5л Календарь 10-11-12 60. Тамбов 80.00 р Окончание торгов: 13/08 16:55 Продавец: Волк07 (3600) |
ХМК 50-летие второго Полярного года. 10.11.81.. 35.00 р. 0 ставок Полтава 280.00 р Окончание торгов: 19 часов Продавец: alb2000 (2117) |
ХМК СССР № 15262 (81-523) 10.11.81 IX конгресс кардиологов Москва Медицина 20.00 р. 0 ставок Брянск 70.00 р Окончание торгов: 06/07 22:24 Продавец: святой32 (1286) |
1982 ХМК 100-летие первого международного полярного года Арктика Парусник 10.11.81 Калашников Север 25.00 р. 0 ставок 30.00 р. Нижний Новгород 100.00 р Окончание торгов: 21/06 09:35 Продавец: ZaKos_2008 (9353) |
Советская игрушка обезьяна винтаж M91b8cb78 300.00 р. 0 ставок 500.00 р. блиц-цена Ейск 150.00 р Окончание торгов: 1 день Продавец: tstst23 (2648) |
Радиолампа 3Ц18П (87) (нет фото) ИзЗиПа. 10ъ5ъъ 10.00 р. Ижевск 1.00 р Окончание торгов: 2 дня Продавец: izzipa (1513) |
Skoda Superb B8 (Superb-III) combi 1/43 Шкода Суперб-3 — 2015г универсал — комби 1:43 БЕЛЫЙ! / WHITE 3499. Санкт-Петербург договорная Окончание торгов: 07/08 02:15 Продавец: Modeli-SPb (32) |
К050Россия1909 3-й период 4-й выпуск №50.Надпечатка 3на5 копеек коп.141Х81.Каталог.разновидность-2шт 950.00 р. 0 ставок 1450.00 р. блиц-цена Санкт-Петербург 120.00 р Окончание торгов: 21/06 23:53 Продавец: pljushkin2000 (24232) |
Афиша кино. Первая Конная. 1984. 87,5-55,5 см. 890.00 р. 0 ставок 895.00 р. блиц-цена Москва 399.00 р Окончание торгов: 2 дня Продавец: Ретроархив (2669) |
Плакат Афиша. Первая Конная. 890.00 р. 0 ставок 895.00 р. блиц-цена Москва 399.00 р Окончание торгов: 2 дня Продавец: Ретроархив (2669) |
Б.С.Иванов. Первые шаги радиолюбителя. Выпуск 5. Для умелых рук. 1970 г. № 11 (317). Приложение к ЮТ 195.00 р. 0 ставок Николаев договорная Окончание торгов: 2 дня Продавец: Яновский Александр Иванович (1409) |
СССР МК 10.11.81 международный полярный год 10.00 р. 0 ставок 20.00 р. блиц-цена Ижевск 50.00 р Окончание торгов: 2 дня Продавец: MVV10 (1819) |
Kemei KM-5886 3 в 1 Моющийся Аккумуляторная Электробритва 5 Электрический 5d Головка Бритвы Электроб 1399. Пекин договорная Окончание торгов: 24/06 04:15 Продавец: Mishak (74) |
ХМК СССР 1981 (10.11.81.) Гродно.Памятник Элизе Ожешко. 25.00 р. Оренбург 80.00 р Окончание торгов: 05/07 07:16 Продавец: chang26562 (1272) |
Skoda Superb B8 (Superb-III) combi 1:43 Шкода Суперб-3 — 2015г универсал СЕРЕБРИСТЫЙ / SILVER 2499.00 р. Санкт-Петербург договорная Окончание торгов: 02/07 02:20 Продавец: Modeli-SPb (32) |
Skoda Superb B8 (Superb-III) combi 1:43 Шкода Суперб-3 — 2015г универсал СЕРЫЙ / GREY 2997.00 р. Санкт-Петербург договорная Окончание торгов: 02/07 02:20 Продавец: Modeli-SPb (32) |
А4688 ДМПК 1982 (10.11.81) Москва Гостиница Космос Архитектура Города СССР 60.00 р. 0 ставок 70.00 р. блиц-цена Алма-Ата договорная Окончание торгов: 27/06 04:24 Продавец: Alex111KZ (13545) |
ХМК Гродно. Памятник Элизе Ожешко. 10.11.81. 40.00 р. 0 ставок Полтава 280.00 р Окончание торгов: 06/07 08:23 Продавец: alb2000 (2117) |
Монета Афганистан 2 афгани 1978 год №9-82 200.00 р. Красноярск 100.00 р Продавец: Chronos-24 (6015) |
Моршанск Нефильтрованное 1,5 л Календарь 10-11-12 200.00 р. Тамбов 80.00 р Окончание торгов: 14/08 17:42 Продавец: Волк07 (3600) |
Volkswagen Passat B8 Variant 2015г Herpa 1:43 VW — Black-Brown Met.- Фольксваген Пассат -8 универсал 3199.00 р. Санкт-Петербург договорная Окончание торгов: 02/07 02:20 Продавец: Modeli-SPb (32) |
Volkswagen Passat 2015г ( B8) sedan silver Herpa 1/43 Фольксваген Пассат NEW седан серебристая 1:43 3299.00 р. Санкт-Петербург договорная Окончание торгов: 02/07 02:20 Продавец: Modeli-SPb (32) |
Volkswagen Passat 2015г. ( B8) sedan black Herpa 1/43 Фольксваген Пассат NEW седан 1:43 чёрный 3299.00 р. Санкт-Петербург договорная Окончание торгов: 02/07 02:20 Продавец: Modeli-SPb (32) |
Г862. №4196-97. ** ОСВОЕНИЕ КОСМОСА. АМС. «ВЕНЕРА-8». АМС. «МАРС-3». БЛОК. Р-Р:89.5Х69 мм. 630.00 р. Москва 80.00 р Окончание торгов: 21/07 15:47 Продавец: Russtamp9 (11770) |
1914 В пользу воинов и их семейств 3к+1к кварт ЛИН 12,5 (Сол. №97А) ** №2 900.00 р. Торг уместен Зеленоград 70.00 р Окончание торгов: 17/07 01:20 Продавец: ppd (1278) |
Филиппины 10 песо 1978 525 АЗ-2 80р 80.00 р. Москва 60.00 р Окончание торгов: 28/06 00:15 Продавец: l_margo (2048) |
подшивка журнала «РАБОТНИЦА»- 1957 (в наличии № 5,6,7,10,11,12) 480.00 р. Арзамас 300.00 р Окончание торгов: 06/08 11:14 Продавец: wint59 (2508) |
О716. МОНЕТА. 1 КОПЕЙКА. 1891. СПБ. МЕДЬ. ВЕС-3.1гр. Ф-21.5. мм. 880.00 р. Москва 80.00 р Окончание торгов: 30/06 18:47 Продавец: Russtamp9 (11770) |
Бельгия 5 франков 1986 год №10 (А11) 10.00 р. Москва 70.00 р Окончание торгов: 22/06 07:35 Продавец: AndrCh58 (5426) |
KM#91
00 р.
00 р
00 р
00 р
«>Уточните поиск: 1 копейка 1 рубль 2013 CCCP альбом Англия винтаж война Германия дешево живопись животные значки СССР золото империя коллекционирование коллекция личности масштабные модели набор недорого новая нумизматика оригинал Оригинал персоналии Погодовка РФ Погодовка СССР подарок Почтовые марки птицы Российская Империя россия после 1991г серебро Серебро серебряная монета СНГ спецгашение СССР фауна филателия хорошее состояние Царская Россия чистая чистые марки эмаль юбилейная юбилейные Юбилейные монеты Южная Африка Еще…
00 р.
блиц-цена
00 р.
1984. 87.5-55,5 см.
00 р.SBI3U | 11 класс по биологии | Онлайн-курс
Как сказано в «Growing Success 2010», основная цель аттестации и оценивания — улучшить обучение учащихся. Информация, собранная посредством оценивания, помогает учителям определять сильные и слабые стороны учащихся в достижении ими ожиданий по учебной программе по каждому курсу.
Эта информация также служит руководством для учителей в адаптации учебной программы и учебных подходов к потребностям учащихся, а также в оценке общей эффективности программ и практики в классе.В рамках оценивания учителя предоставляют учащимся описательную обратную связь, которая направляет их усилия на улучшение. Оценка относится к процессу оценки качества работы студента на основе установленных критериев и присвоения значения, представляющего это качество. При обучении необходимо учитывать все ожидания, связанные с учебной программой, но при оценке основное внимание уделяется достижению учащимися общих ожиданий.
Достижение студентом общих ожиданий оценивается на основе его или ее достижения соответствующих конкретных ожиданий.Учителя будут использовать свое профессиональное суждение, чтобы определить, какие конкретные ожидания следует использовать для оценки достижения общих ожиданий, а какие из них будут учтены в инструкциях и оценках, но не обязательно оцениваются. Чтобы гарантировать, что оценка и оценка являются действительными и надежными, и что они ведут к улучшению обучения учащихся, учителя должны использовать стратегии оценки, которые:
- Обращайте внимание как на то, что студенты учатся, так и на то, насколько хорошо они учатся
- Основаны как на категориях знаний и навыков, так и на описаниях уровней достижений, приведенных в таблице достижений
- Различны по своему характеру, управляются в течение определенного периода времени и предназначены для предоставления студентам возможности продемонстрировать весь спектр своего обучения
- Соответствуют используемой учебной деятельности, целям обучения, а также потребностям и опыту учащихся
- Справедливы ко всем ученикам
- Принять учащихся с особыми образовательными потребностями в соответствии со стратегиями, изложенными в их индивидуальном плане обучения
- Удовлетворение потребностей студентов, изучающих язык обучения
- Убедитесь, что каждому студенту даны четкие указания по улучшению
- Содействовать способности учащихся оценивать собственное обучение и ставить конкретные цели
- Включать использование образцов работ студентов, подтверждающих их достижения
- Четко сообщаются учащимся и родителям в начале учебного года и в другие соответствующие моменты в течение учебного года.
В таблице достижений выделены четыре категории знаний и навыков. Они включают; знания и понимание, мышление, общение и применение. Учителя должны гарантировать, что работа учащихся оценивается и / или оценивается сбалансированным образом по четырем категориям, и что достижение определенных ожиданий рассматривается в рамках соответствующих категорий. Итоговая оценка записывается для этого курса, и зачет предоставляется и записывается для этого курса, если оценка студента составляет 50% или выше.Итоговая оценка по этому курсу будет определена следующим образом:
- Семьдесят процентов оценки будет основываться на оценках, проводимых на протяжении всего курса. Эта часть оценки должна отражать наиболее последовательный уровень достижений учащегося на протяжении всего курса, хотя следует уделять особое внимание более поздним свидетельствам достижений.
- Тридцать процентов оценки будут основаны на итоговой оценке и выставлены ближе к концу курса.
Неслучайные паттерны вирусного разнообразия
Baize, S. et al. Появление заирской болезни, вызванной вирусом Эбола, в Гвинее. N. Engl. J. Med. 371 , 1418–1425 (2014).
CAS Статья Google Scholar
Группа реагирования ВОЗ на Эболу. Болезнь, вызванная вирусом Эбола, в Западной Африке — первые 9 месяцев эпидемии и перспективные прогнозы. N. Engl. J. Med. 371 , 1481–1495 (2014).
Morse, S. S. et al. Прогнозирование и предотвращение следующей пандемии зоонозов. Ланцет 380 , 1956–1965 (2012).
Артикул Google Scholar
Jones, K. E. et al. Мировые тенденции возникновения инфекционных заболеваний. Природа 451 , 990–993 (2008).
ADS CAS Статья Google Scholar
Кареш, В.B. et al. Экология зоонозов: естественные и противоестественные истории. Ланцет 380 , 1936–1945 (2012).
Артикул Google Scholar
Woolhouse, M. E. & Gowtage-Sequeria, S. Диапазон хозяев, а также новые и вновь появляющиеся патогены. Emerg. Заразить. Дис. 11 , 1842–1847 (2005).
Артикул Google Scholar
Кизинг, Ф.и другие. Воздействие биоразнообразия на возникновение и распространение инфекционных заболеваний. Природа 468 , 647–652 (2010).
ADS CAS Статья Google Scholar
Смолински, М. С., Гамбург, М. А. и Ледерберг, Дж. В Микробные угрозы здоровью: возникновение, обнаружение и реагирование Институт медицины; Национальная академия прессы (2003).
Вайс, Р.А.& Макмайкл, А. Дж. Социальные и экологические факторы риска возникновения инфекционных заболеваний. Nat. Med. 10 , S70 – S76 (2004).
CAS Статья Google Scholar
Всемирный банк. Люди, патогены и наша планета: экономика единого здоровья. т. 2. Отчет № 69145-GLB (2012).
Всемирный банк. Экономические последствия эпидемии Эболы в 2014 году: краткосрочные и среднесрочные оценки для Западной Африки Всемирный банк (2014).
Пайк, Дж., Богич, Т., Элвуд, С., Финнофф, Д. К. и Дашак, П. Экономическая оптимизация глобальной стратегии борьбы с угрозой пандемии. Proc. Natl Acad. Sci. США 111 , 18519–18523 (2014).
ADS CAS Статья Google Scholar
Хан, Б. А., Шмидт, Дж. П., Боуден, С. Э. и Дрейк, Дж. М. Резервуары грызунов для будущих зоонозных болезней. Proc. Natl Acad.Sci. США 112 , 7039–7044 (2015).
ADS CAS Статья Google Scholar
Эванс, М. Р. и др. Экология систем прогнозирования. Proc. Биол. Sci. 280 , http://dx.doi.org/10.1098/rspb.2013.1452 (2013).
Мерфи Ф. А. Новые зоонозы. Emerg. Заразить. Дис. 4 , 429–435 (1998).
CAS Статья Google Scholar
Чейз, Дж.М. и Лейболд, М. А. Экологические ниши: объединение классических и современных подходов University of Chicago Press (2003).
Хаббелл, С. П. Единая нейтральная теория биоразнообразия и биогеографии Princeton University Press (2001).
Чейз, Дж. М. и Майерс, Дж. А. Отделение важности экологических ниш от случайных процессов в разных масштабах. Philos. Пер. R. Soc. Лондон. B Biol. Sci. 366 , 2351–2363 (2011).
Артикул Google Scholar
Чейз, Дж. М., Крафт, Н. Дж. Б., Смит, К. Г., Велленд, М. и Иноуэ, Б. Д. Использование нулевых моделей для отделения различий в различиях сообществ от вариаций в альфа-разнообразии. Экосфера 2 , DOI 10.1890 / Es10-00117.1 (2011).
Li, C. X. et al. Беспрецедентное геномное разнообразие РНК-вирусов у членистоногих показывает происхождение РНК-вирусов с отрицательным смыслом. eLife 4 , DOI: 10.7554 / eLife.05378 (2015).
Ллойд-Смит, Дж. О. и др. Динамика эпидемии на стыке человека и животного. Наука 326 , 1362–1367 (2009).
ADS CAS Статья Google Scholar
Hasan, M. K. et al. Распространение макак-резусов (Macaca mulatta) в Бангладеш: межпопуляционные различия в размере и составе группы. Primate Conserv. 26 , 125–132 (2013).
Артикул Google Scholar
Фурман, Дж. А. Структура микробного сообщества и ее функциональные последствия. Природа 459 , 193–199 (2009).
ADS CAS Статья Google Scholar
Энтони, С. Дж. И др. Стратегия оценки неизвестного вирусного разнообразия у млекопитающих. MBio 4 , e00598–13 (2013).
Артикул Google Scholar
Чао, А. в Энциклопедия статистических наук Vol. 12 , ред. Балакришнан Н., Рид К. Б., Видакович Б. Вили (2005).
Чао, А., Колвелл, Р. К., Лин, К. В. и Готелли, Н. Дж. Достаточная выборка для асимптотических оценок минимального видового богатства. Экология 90 , 1125–1133 (2009).
Артикул Google Scholar
Магурран А. Э. и Хендерсон П. А. в журнале « Биологическое разнообразие: границы измерения и оценки» под ред. Магурран А. Э., Макгилл Б. Дж. Издательство Оксфордского университета (2011).
Jacomy, M., Venturini, T., Heymann, S. & Bastian, M. ForceAtlas2, алгоритм компоновки непрерывного графа для удобной визуализации сети, разработанный для программного обеспечения Gephi. Plos One 9 , e98679 (2014).
ADS Статья Google Scholar
Йост, Л., Чао, А. и Чаздон, Р. Л. в книге « Биологическое разнообразие: границы измерения и оценки», , ред. Магурран А. Э., Макгилл Б. Дж. Издательство Оксфордского университета (2011).
Стеген, Дж. К., Лин, X. Дж., Конопка, А. Э. и Фредриксон, Дж. К. Стохастические и детерминированные процессы сборки в подповерхностных микробных сообществах. ISME J. 6 , 1653–1664 (2012).
CAS Статья Google Scholar
Драй, С., Лежандр, П. и Перес-Нето, П. Р. Пространственное моделирование: комплексная основа для анализа основных координат соседних матриц (PCNM). Ecol. Модель. 196 , 483–493 (2006).
Артикул Google Scholar
Боркар Д. и Лежандр П. Полномасштабный пространственный анализ экологических данных с помощью главных координат соседних матриц. Ecol. Модель. 153 , 51–68 (2002).
Артикул Google Scholar
Лежандр, П., Лапойнт, Ф. Дж. И Касгрейн, П. Моделирование эволюции мозга по поведению — метод перестановочной регрессии. Evolution 48 , 1487–1499 (1994).
Артикул Google Scholar
Дрикамер, Л. К. и Весси, С. Х.Смена групп самцов макак-резусов на свободном выгуле. Приматы 14 , 359–368 (1973).
Артикул Google Scholar
Geoffroy, M.C. & Salvetti, A. Вспомогательные функции, необходимые для роста аденоассоциированного вируса дикого типа и рекомбинантного аденоассоциированного вируса. Curr. Gene Ther. 5 , 265–271 (2005).
CAS Статья Google Scholar
Pairs — программа FORTRAN для изучения попарных ассоциаций видов в экологических матрицах http: // www.keib.umk.pl/pairs. 1.0 (Департамент экологии животных, Торунь, Польша, (2008).
Fuhrman, JA & Steele, JA Структура морского бактериопланктона в сообществе: закономерности, сети и связь с функцией. Aquat. Microb. Ecol. 53 , 69–81 (2008).
Статья Google Scholar
Эдгар Р.С. МЫШЦЫ: множественное выравнивание последовательностей с высокой точностью и высокой пропускной способностью. Nucleic Acids Res. 32 , 1792–1797 (2004).
CAS Статья Google Scholar
Se-Al: редактор выравнивания последовательности, версия 2.0a11 http://tree.bio.ed.ac.uk/software/seal/ (2002).
PAUP *. Филогенетический анализ с использованием экономичности (* и других методов), версия 4.0b10.Sinauer Associates., Сандерленд, Массачусетс (2003).
Дарриба, Д., Табоада, Г. Л., Доалло, Р.& Посада, Д. jModelTest 2: больше моделей, новая эвристика и параллельные вычисления. Nat. Методы 9 , 772 (2012).
CAS Статья Google Scholar
Летуник, И. и Борк, П. Interactive Tree Of Life v2: онлайн-аннотация и отображение филогенетических деревьев стало проще. Nucleic Acids Res. 39 , W475 – W478 (2011).
CAS Статья Google Scholar
При тяжелом остром респираторном синдроме дополнительные белки 6 и 9b коронавируса взаимодействуют in vivo
Основные моменты
► Впервые показано взаимодействие дополнительных белков 6 и 9b SARS-CoV.► In vivo экспериментов и протеомных подходов были использованы для идентификации взаимодействия между этими белками SARS-CoV. ► Совместная локализация белков 6 и 9b в клетках, инфицированных SARS-CoV, усилила это недавно описанное взаимодействие.
Ключевые слова: коронавирус SARS, белок 6, белок 9b, белок-белковые взаимодействия, LC-MS
Abstract
3′-проксимальная треть генома коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV) кодирует структурные белки и восемь дополнительных белков, включая 3a, 3b, 6, 7a, 7b, 8a, 8b и 9b, длина которых варьируется от 39 до 274 аминокислот, которые не имеют значительной гомологии с вирусными белками известных коронавирусов.Белок SARS-CoV 6 имеет длину 63 аминокислоты и ранее участвовал в патогенности и репликации вируса. Для дальнейшего анализа этих функций во время инфекционного цикла SARS-CoV было проанализировано взаимодействие белка 6 SARS-CoV с другими вирусными и / или клеточными факторами. Иммунопреципитация белка 6 из экстрактов клеток, инфицированных SARS-CoV, и масс-спектрометрический анализ выявили взаимодействие вирусных белков 6 и 9b в биологически релевантных условиях. Это взаимодействие было усилено совместной локализацией обоих белков в цитоплазме клеток, инфицированных SARS-CoV.
Тяжелый острый респираторный синдром (SARS) поразил более 8000 человек и стал причиной более 800 смертей в 26 странах с момента возникновения первого случая заболевания в Китае в ноябре 2002 года. Этиологическим агентом этого заболевания оказался ранее неизвестный коронавирус ( SARS-CoV) ( Drosten et al., 2003 , Fouchier et al., 2003 , Ksiazek et al., 2003 , Lee et al., 2003 , Peiris et al., 2003 , Rota et al., 2003 ). В последние годы были обнаружены вирусы, подобные SARS-CoV, циркулирующие у летучих мышей с нескольких континентов ( Drexler et al., 2010 , Lau et al., 2005 , Quan et al., 2010 , Rihtaric et al., 2010 ), а летучие мыши были описаны как предполагаемые резервуары SARS-CoV ( Calisher et al., 2006, , , , , Li et al., 2005, ). Таким образом, возможность повторного возникновения ОРВИ сохраняется.
Коронавирусы представляют собой семейство оболочечных вирусов с инфекционным геномом одноцепочечной положительно-смысловой РНК размером около 30 т.п.н. Организация генома SARS-CoV аналогична организации других коронавирусов. 5′-проксимальные две трети генома кодируют ген 1, по существу участвующий в синтезе вирусной РНК, тогда как 3′-проксимальная треть генома кодирует структурные белки (шип, S; оболочка, E; мембрана, M и нуклеокапсид, N) и восемь дополнительных белков (3a, 3b, 6, 7a, 7b, 8a, 8b и 9b) длиной от 39 до 274 аминокислот, которые не имеют значительной гомологии с вирусными белками известных коронавирусов ( Narayanan и другие., 2008 ). Некоторые из этих дополнительных белков, 3a, 6, 7a, 7b и 9b, были описаны как структурные белки ( Huang et al., 2006 , Huang et al., 2007 , Ito et al., 2005 , Schaecher et al., 2007 , Xu et al., 2009 ).
Хотя функция многих дополнительных белков остается неясной, белок 6 SARS-CoV является одним из наиболее охарактеризованных дополнительных белков. Белок SARS-CoV 6 имеет длину 63 аминокислоты, его мРНК присутствует в клетках, инфицированных SARS-CoV ( Snijder et al., 2003 ), а минимальная регуляторная последовательность транскрипции расположена выше открытой рамки считывания гена 6 (ORF6). Были предоставлены доказательства присутствия белка 6 в клинических образцах ( Chan et al., 2005, ), а в сыворотках пациентов с SARS были обнаружены антитела против его С-конца ( Chow et al., 2006, ). Было обнаружено, что белок 6 локализуется в шероховатом эндоплазматическом ретикулуме (ER) и аппарате Гольджи в трансфецированных клетках и в связанном с пузырьками внутриклеточном распределении в клетках, инфицированных SARS-CoV ( Geng et al., 2005 , Gunalan et al., 2011 , Kumar et al., 2007 , Pewe et al., 2005 ). Анализ рекомбинантного вируса гепатита мышей (MHV), кодирующего белок 6 SARS-CoV, показал, что он усиливает вирулентность ослабленного мышиного коронавируса ( Pewe et al., 2005 ). Белок 6 коиммунопреципитирует с вирусными РНК и ускоряет репликацию коронавируса мыши ( Tangudu et al., 2007, ). Предыдущие данные показали внутриклеточную мембранную локализацию белка 6 в рекомбинантных клетках, инфицированных MHV ( Pewe et al., 2005 ) и предположил его возможную роль в связанных с мембранами событиях цикла репликации коронавируса ( Tangudu et al., 2007 ), включая синтез вирусной РНК ( Gosert et al., 2002 , Stertz et al. ., 2007, ), синтез белковой мембраны вируса, сборку и секрецию вируса ( de Haan and Rottier, 2005, ). Совсем недавно было показано, что белок 6 вызывает перестройку мембран, и мы продемонстрировали, что он необходим для оптимальной репликации SARS-CoV ( Zhao et al., 2009 , Zhou et al., 2010 ). Кроме того, было показано, что белок 6 ингибирует синтез и передачу сигналов IFN-β ( Kopecky-Bromberg et al., 2007, ) и может действовать как индуктор клеточной смерти ( Ye et al., 2010, ). Аминокислотная последовательность белка 6 и его ранее описанного трансмембранного домена ( Zhou et al., 2010 ) показана в A.
Аминокислотная последовательность и трансмембранные домены белков 6 и 9b коронавируса SARS. (A) Аминокислотная последовательность белка 6 показана черным цветом.Трансмембранный домен выделен серым цветом. (B) Аминокислотная последовательность белка 9b. Аминокислоты, участвующие в гидрофобном липид-связывающем туннеле, выделены серым цветом.
Взаимодействие белка 6 с другими вирусными белками было описано ранее, хотя большинство из этих взаимодействий ограничено анализами двугибридной или котрансфекционной ( Pan et al., 2008 , von Brunn et al., 2007 ). В клетках, инфицированных SARS-CoV, описана только совместная локализация белка 6 с nsp8 ( Kumar et al., 2007 ).
Белок 9b синтезируется из альтернативной рамки считывания гена N в SARS-CoV и имеет длину 98 аминокислот. У пациентов были обнаружены антитела против белка 9b, что свидетельствует о том, что он вырабатывается во время инфекции ( Qiu et al., 2005, ). Экспрессия усеченных рекомбинантных белков 9b в клетках млекопитающих ранее показала, что белок 9b связывается с клеточными мембранами и, по-видимому, связан с внутриклеточными везикулярными структурами, что указывает на возможную роль в сборке вируса через ассоциацию с мембраной ( Meier et al., 2006 ). Соответственно, белок 9b был описан как белок, связанный с вирионом ( Xu et al., 2009, ), хотя его функция еще предстоит полностью описать. Кристаллическая структура белка 9b указывает на то, что это необычный мембранно-связывающий белок с длинным гидрофобным липид-связывающим туннелем ( Meier et al., 2006, ). Аминокислотная последовательность белка 9b и аминокислоты, участвующие в этой центральной гидрофобной полости, которая связывает липидные молекулы, выделены на B.
Для выяснения функции, опосредованной белком 6, и анализа любого возможного взаимодействия белка 6 SARS-CoV с другими клеточными и / или вирусными факторами во время цикла вирусной инфекции SARS-CoV был проведен протеомный подход на клетках, инфицированных SARS-CoV. , который может предложить более биологически релевантные результаты, чем другие методы и анализы, выполненные ранее. Кроличьи антитела к протеину 6 и предиммунные кроличьи антитела использовали для иммунопреципитации ложных и инфицированных SARS-CoV клеток.Клетки Vero E6 были инфицированы SARS-CoV при MOI 8 или ложно инфицированы в качестве контроля. Все работы были выполнены в трех экземплярах в помещениях с уровнем биобезопасности 3, персоналом, носившим воздухоочистительные респираторы с положительным давлением (HEPA AirMate; 3M, Saint Paul, MN). Чтобы выбрать подходящее время после инфицирования для проведения анализов взаимодействия и подтверждения его субклеточной локализации во время инфекции, динамику экспрессии белка 6 отслеживали с помощью вестерн-блоттинга и иммунофлуоресцентных анализов при высокой множественности инфекции ( ).Кинетику экспрессии протеина 6 отслеживали в разное время после инфицирования в экстрактах общих клеток SARS-CoV или ложно инфицированных клетках с помощью вестерн-блоттинга с крысиным антителом против протеина 6 ( Zhao et al., 2009, ). Специфическая полоса 7 кДа наблюдалась в экстрактах клеток, инфицированных SARS-CoV (A, анти-протеин 6), и эта полоса не наблюдалась в экстрактах, инфицированных ложным вирусом. Инфекция SARS-CoV была подтверждена мониторингом экспрессии нуклеопротеина (N) (Imgenex), которая проявлялась в виде двойной полосы приблизительно 46 кДа (A, антинуклеопротеин).Белок 6 был обнаружен в клетках, инфицированных SARS-CoV, по крайней мере, через 4 часа после инфицирования (hpi) (A, дорожка 2), а высокие уровни белка 6 были обнаружены при 17 hpi (A, дорожка 4). Для анализа субклеточного расположения белка 6, кроличьи анти-PDI в качестве маркера эндоплазматического ретикулума (ER) (Santa Cruz Biotechnology) (B, зеленый) и крысиные антитела к белку 6 (B, красный) использовали для конфокальной микроскопии. анализ. Этот анализ показал, что белок 6 частично локализован в ER в клетках, инфицированных SARS-CoV (B, слияние).Таким образом, было показано, что белок 6 экспрессируется на высоких уровнях с 17 hpi во время цикла заражения SARS-CoV и что этот белок действительно локализован в цитоплазме и частично в ER инфицированных SARS-CoV клеток на 17 hpi.
Экспрессия белка 6 SARS-CoV и субклеточная локализация. Клетки Vero E6 были инфицированы SARS-CoV (S) или ложно инфицированы (M). В часы после инфицирования, указанные на фигуре (h.p.i), клетки либо фиксировали для иммунофлуоресценции, либо все экстракты клеток получали в буфере Лэммли.(A) Полные клеточные экстракты разделяли с помощью SDS-PAGE и экспрессию нуклеопротеина (N) и белка 6 (6) анализировали с помощью вестерн-блоттинга. (B) Культуры клеток, инфицированных SARS-CoV, фиксировали при 17 л. Конфокальная иммунофлуоресценция протеина 6 и ER была проявлена с помощью кроличьих антител против PDI (маркера ER) и крысиных антител против протеина 6. Данные были визуализированы с помощью конъюгированных с Alexa Fluor 488 антител против кролика (зеленый) и антител против крысы (красный), конъюгированных с TxRed. Совместная локализация белка 6 в ER показана желтым цветом (слияние).(C) Экспрессию протеина 6 детектировали с помощью иммунофлуоресценции с использованием кроличьих антител против протеина 6 и антител против кроликов, конъюгированных с Tx-Red (a – c). DAPI (синий) использовали для окрашивания ядер клеток (d – f). (Для интерпретации ссылок на цвет в легенде этого рисунка читатель может обратиться к веб-версии статьи.)
Для проведения исследований взаимодействия кроличьи антитела, специфичные к белку 6, были получены с использованием той же методологии, что и для создания крыс. -антитело против протеина 6 ( Zhao et al., 2009 ). Чтобы подтвердить специфичность кроличьих антител к протеину 6, иммунофлуоресцентный анализ проводили с кроличьими антителами против протеина 6 несколько раз после инфицирования (C, прямоугольники a, b и c, красные). Окрашивание DAPI использовали в качестве контроля для локализации ядра клетки (C, прямоугольники d, e и f, синий цвет). Антитело кролика показало специфический сигнал только в инфицированных клетках, и картина субклеточного распределения сигнала аналогична наблюдаемой для белка 6 (B и Geng et al., 2005 , Pewe et al., 2005 ), что указывает на то, что антитело специфически распознает белок 6.
Для идентификации вирусных и клеточных белков, которые взаимодействуют с белком 6, иммунные матрицы были приготовлены путем инкубации белка A в течение ночи. -агароза с сывороткой крови кролика против протеина 6 или доиммунной сывороткой. Растворимые экстракты из ложных или инфицированных SARS-CoV Vero E6 клеток получали при 17 hpi в буфере TNE-1% NP-40 (100 мМ NaCl, 5 мМ EDTA, 50 мМ Tris-HCl, 1% Nonidet P-40, pH 7. .5) содержащие ингибиторы протеаз (Roche). Матрицы инкубировали с растворимыми экстрактами в течение 3 ч и промывали в том же буфере, используя уменьшающуюся концентрацию детергента. Окончательное уравновешивание в 50 мМ бикарбонате аммония требовалось для дальнейшего расщепления трипсином и масс-спектрометрического анализа. Аликвоту связанного материала элюировали в буфере Лэммли и обрабатывали для вестерн-блоттинга с использованием крысиного антитела против протеина 6 для подтверждения специфической иммунопреципитации протеина 6 (А). Кроличье антитело против белка 6 специфически иммунопреципитировало белок 6, присутствующий в клетках, инфицированных SARS-CoV (A, дорожка 6), поскольку ни один белок не был обнаружен с этим антителом в экстрактах неинфицированных клеток (A, дорожка 5), и нет белка. был обнаружен с использованием преиммунных сывороток для иммунопреципитации клеток, инфицированных SARS-CoV (A, дорожка 4).Сложность этих образцов белка была оценена на изображении геля, окрашенного серебром (B). Подавляющее количество протеина A и IgG было обнаружено в иммунопреципитированных образцах (B, строки 4-7).
Иммунопреципитация белка 6 в клетках, инфицированных SARS-CoV. Иммунные матрицы получали путем инкубации протеина A-сепахрозы либо с сывороткой против протеина 6 (анти протеин 6), либо с предиммунной кроличьей сывороткой (антиконтроль). Эти матрицы инкубировали с растворимыми экстрактами инфицированных SARS-CoV (S) или ложно-инфицированных клеток (M).(A) После промывания аликвоты всех экстрактов (вход) или иммунопреципитатов анализировали вестерн-блоттингом с использованием крысиных антител против белка 6. (B) Сложность всех экстрактов (исходный) и иммунопреципитированных образцов была проанализирована путем окрашивания серебром. Стрелки показывают IgG, а острие стрелки показывает белок A.
Оставшиеся аликвоты связанных со смолой иммунопреципитированных белков расщепляли 1 мкг модифицированного свиной трипсина (Sequence grade, Promega) в течение 1 часа при 37 ° C в условиях встряхивания ( 1300 об / мин).Реакции останавливали добавлением уксусной кислоты и триптические пептиды анализировали с помощью ЖХ-МС на масс-спектрометре Esquire HCT Ultra (Bruker-Daltoniks, Бремен, Германия) в соответствии с описанными процедурами ( Calvo et al., 2005, ). . Несмотря на высокое количество протеина А по сравнению с другими протеинами, пептид был обнаружен на хроматограмме в образце, инфицированном SARS-CoV, иммунопреципитированном специфическим антителом против протеина 6 (время удерживания 34,1 мин, не показано), но не в контрольный образец иммунопреципитировали с помощью преиммунной сыворотки.Всесторонний анализ соответствующего спектра МС / МС (A) однозначно идентифицировал последовательность LGSQLSLSMAR белка SARS-CoV 9b с оценкой Mascot 68, что означает, что отдельные ионы имеют более 57 баллов идентичности или обширной гомологии ( p <0,05). Эта последовательность составляет 11% покрытия белка, значение, которое находится в пределах описанных общих значений из-за короткой последовательности белка 9b. Мы попытались использовать антисыворотку против 9b в Вестерн-блоттинге для оценки co-IP белка 9b.Однако этот метод был недостаточно чувствительным для обнаружения белка 9b в этих экспериментальных условиях. Чтобы улучшить результаты, полученные с помощью МС, новый набор образцов был проанализирован с помощью ЖХ – МС с более чувствительным режимом сканирования (Мониторинг одиночных ионов, SIM), который анализирует только указанные массы. Таким образом, выбранные ионы, производные от белка 9b, могут быть обнаружены и фрагментированы более эффективно. Массы на m / z 581,8 и 725,3, соответствующие двухзарядным пептидам LGSQLSLSMAR и AFQSTPIVVQMTK соответственно, отслеживали по градиенту.Оба иона были должным образом обнаружены и проанализированы в инфицированных образцах, иммунореципитированных анти-6, но не были обнаружены в контрольных образцах, иммунопреципитированных с помощью преиммунных сывороток (B). Все эти данные указывают на то, что белки 6 и 9b взаимодействуют in vivo .
Идентификация белка 9b, взаимодействующего с SARS-CoV, методом ЖХ-МС. (A) МС / МС спектр от двухзарядного иона при m / z 581,8 Да, охватывающий последовательность LGSQLSLSMAR и соответствующий белку 9b из SARS-CoV.На рисунке показан основной ряд фрагментации (γ-карбокси и β-амино). Потеря воды отмечена знаком (*). (B) Хроматограмма извлеченных ионов (EIC) экспериментов SIM, контролирующих двухзарядные ионы на высоте м / z 581,8 (LGSQLSLSMAR, слева) и 725,3 (AFQSTPIVVQMTK, справа). Верхняя и нижняя панели показывают, соответственно, результаты для препаратов контрольных и анти-6-иммунопреципитированных клеток, инфицированных SARS.
Мы впервые обнаружили взаимодействие белка 6 с белком 9b с помощью экспериментов с понижением уровня во время заражения SARS-CoV.Ранее было описано, что белок 6 SARS-CoV взаимодействует с кариоферином α2 и вирусными белками nsp8, nsp3 и 7b ( Frieman et al., 2007 , Kumar et al., 2007 , von Brunn et al., 2007 ), которые не были идентифицированы в данной работе. Поскольку в этой и цитируемых статьях использовались разные методы, могут быть получены разные результаты. Несколько исследований вирусного белок-белкового взаимодействия SARS-CoV показали разные результаты в зависимости от технологии, используемой для их проведения.Таким образом, двухгибридные анализы, проведенные на клетках млекопитающих, показали лишь частично совпадающие результаты с результатами, показанными в дрожжевых двугибридных анализах ( Imbert et al., 2008 , Pan et al., 2008 , фон Брунн и др., 2007, ). Удивительно, но даже в двух различных исследованиях, в которых проводились схожие двухгибридные тесты дрожжей, не было обнаружено перекрывающихся взаимодействий ( Imbert et al., 2008, , von Brunn et al., 2007, ). Присутствие высоких уровней протеина А в этой работе может затруднить обнаружение других ранее описанных белков, взаимодействующих с белком 6 SARS-CoV.
Для подтверждения взаимодействия между белками 6 и 9b были выполнены конфокальные иммунофлуоресцентные анализы ( ). Клетки Vero E6, инфицированные имитатором и SARS-CoV, промывали и фиксировали при 17 hpi 10% параформальдегидом в течение 20 минут и обрабатывали для иммунофлуоресценции в соответствии с описанными процедурами ( Garaigorta et al., 2005, ). Клетки инкубировали с ранее описанными антителами крысы и мыши, специфичными для белков 6 и 9b, соответственно ( Xu et al., 2009, , Zhao et al., 2009 ). Препараты помещали в реагент Prolong и анализировали с помощью конфокальной микроскопии с использованием лазерной сканирующей системы Leica TCS SP5. Изображения получали последовательно каждые 0,5 мкм с использованием программного обеспечения LAS AF 2.6.0 (Leica Microsystems). Для оценки степени совместной локализации сигналов флуоресценции был проведен количественный анализ с использованием той же программы. Было проанализировано минимум 44 клетки, и все они показали коэффициент перекрытия> 0,64, что указывает на частичную совместную локализацию обоих белков.Три типичных количественных показателя показаны в (, маска и совместная локализация).
Белки 6 и 9b частично совместно локализуются в цитоплазме клеток, инфицированных SARS-CoV. Культуры клеток Vero E6 были инфицированы SARS-CoV, зафиксированы и проанализированы методом конфокальной иммунофлуоресценции. Показаны три типичных примера (S.1 – S.2 и S.3). Белок SARS-CoV 6 был обнаружен с помощью крысиного антитела против белка 6 и визуализирован с помощью конъюгированного с Tx-Red антитела против крысы (a, f, k). Белок SARS-CoV 9b детектировали с помощью мышиных антител против белка 9b и визуализировали с помощью конъюгированных с FITC антител против мышиных (b, g, i).Объединенные изображения показывают локализацию белков 6, 9b и ядра, окрашенного DAPI, синим цветом (c, h, m). Маски показывают частичную совместную локализацию белков 6 и 9b в цитоплазме клеток, инфицированных SARS-CoV (d, i, n). Графики показывают количественную оценку сигнала совместной локализации (e, j, o). Звездочкой показана незараженная клетка в качестве контроля. (Для интерпретации ссылок на цвет в легенде этого рисунка читатель отсылается к веб-версии статьи.)
Была показана цитоплазматическая частичная совместная локализация белков 6 и 9b во время инфекции SARS-CoV (, маска) , что указывает на то, что два белка находятся на расстоянии менее 200 нм друг от друга, что подтверждает мнение о том, что белки 6 и 9b могут взаимодействовать in vivo .Экспрессия белка 9b в инфицированных SARS-CoV клетках наблюдалась частично локализованной как в цитоплазме, так и в ядре, что согласуется с описанной субклеточной локализацией рекомбинантного белка 9b в трансфицированных клетках ( Moshynskyy et al., 2007 , von Brunn et al., 2007, ) и в клетках, инфицированных SARS-CoV, при аналогичных hpi ( Sharma et al., 2011 ) (, объединить). Коиммунопреципитация и частичная цитозольная совместная локализация, показанные коэффициентом перекрытия белков 6 и 9b при 17 hpi, согласуются с кинетикой времени, показанной для белка 9b во время инфекции ( Sharma et al., 2011 ). Чтобы подтвердить отсутствие перекрестного сигнала между различными каналами, используемыми в иммунофлуоресцентных анализах, неинфицированная клетка показана в (, S.3 anti-6, anti-9b and merge).
Мы описываем здесь взаимодействие двух вирусных белков in vivo в клетках, инфицированных SARS-CoV, где условия были наиболее вероятными с биологической точки зрения. Однако возможное существование дополнительного фактора, опосредующего взаимодействие между белками 6 и 9b во время инфекции, еще предстоит выяснить, и он может объяснить отсутствие этого взаимодействия в предыдущем анализе белок-белковых взаимодействий SARS-CoV ( Pan et al. ., 2008 , von Brunn et al., 2007 ). Интересно, что аналогичные проведенные здесь масс-спектрометрические исследования уже были описаны для других взаимодействий вирус-вирус или вирус-хозяин ( Kang et al., 2006, , Mayer et al., 2007, ) и для обнаружения специфических белков в очень сложных белковых смесях ( Calvo et al., 2005 , Wolf et al., 2004 , Zhang et al., 2005 ).
SARS-CoV является наиболее патогенным из известных CoV человека ( Weiss and Navas-Martin, 2005, ) и кодирует набор несущественных дополнительных белков, таких как 3a, 3b, 6, 7a, 7b, 8a, 8b и 9b. . Эти белки, такие как 3b и 6, противодействуют защите хозяина ( Frieman et al., 2007, , , , , Kopecky-Bromberg et al., 2007, ), что способствует высокой вирулентности вируса. Для выявления новых вирусных функций, опосредованных белками, и внутривирусных межбелковых взаимодействий был использован протеомный подход с использованием белка SARS-CoV 6 в качестве приманки.Мы описываем новое взаимодействие белка 6 SARS-CoV с вирусным белком 9b in vivo . Мы также подтверждаем частичную совместную локализацию обоих белков в цитоплазме клеток, инфицированных SARS-CoV, с помощью конфокальной микроскопии, что еще больше подтверждает этот вывод. Тем не менее, необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, является ли это прямым взаимодействием или существует какой-либо другой вирусный / клеточный белок, опосредующий это взаимодействие.
Взаимодействие между этими двумя белками подтверждает возможную роль белка 6 в репликации SARS-CoV, что было предположено путем совместной иммунопреципитации белка 6 с вирусными РНК ( Pewe et al., 2005 , Tangudu et al., 2007 ). Дополнительные данные также предполагают участие белка 6 в репликации, поскольку белок 6 расположен в ER, а репликация происходит на двойных мембранах из ER ( Stertz et al., 2007, ), и мы позже продемонстрировали потребность в белке. 6 для оптимальной репликации SARS-CoV ( Zhao et al., 2009 ). Белок 9b также является небольшим белком, который может взаимодействовать с несколькими вирусными белками SARS-CoV, участвующими в репликации вирусной РНК, такими как nsp3N, nsp3C, nsp5, nsp7, nsp12, nsp13, nsp14, nsp15, 7a, 7b, nsp14 и nsp8 ( von Brunn et al., 2007 ), который также взаимодействует с белком 6 ( Kumar et al., 2007 ). Кроме того, было продемонстрировано взаимодействие между белком 6 и nsp8, вторым RdRp, уникально кодируемым SARS-CoV ( Imbert et al., 2006, ). Все эти данные могут указывать на nsp8 или РНК-опосредованное взаимодействие между белками 6 и 9b, но необходимы дальнейшие исследования, чтобы четко оценить взаимодействие между этими белками.
% PDF-1.7
%
464 0 объект
>
эндобдж
xref
464 122
0000000016 00000 н.
0000003681 00000 н.
0000003900 00000 н.
0000004029 00000 н.
0000004106 00000 п.
0000004128 00000 н.
0000004839 00000 н.
0000005008 00000 н.
0000005163 00000 п.
0000005320 00000 н.
0000005441 00000 н.
0000005556 00000 н.
0000005677 00000 н.
0000005798 00000 н.
0000005911 00000 н.
0000006031 00000 н.
0000006152 00000 н.
0000006273 00000 н.
0000006387 00000 н.
0000006503 00000 н.
0000006620 00000 н.
0000006737 00000 н.
0000006852 00000 н.
0000006966 00000 н.
0000007081 00000 н.
0000007195 00000 н.
0000007309 00000 н.
0000007423 00000 н.
0000007538 00000 п.
0000007694 00000 п.
0000007845 00000 н.
0000007994 00000 н.
0000008129 00000 н.
0000008854 00000 н.
0000009208 00000 н.
0000009646 00000 н.
0000009818 00000 н.
0000010004 00000 п.
0000010062 00000 п.
0000010448 00000 п.
0000010526 00000 п.
0000011093 00000 п.
0000011393 00000 п.
0000011612 00000 п.
0000012179 00000 п.
0000012264 00000 п.
0000013272 00000 п.
0000014302 00000 п.
0000014686 00000 п.
0000014992 00000 п.
0000016126 00000 п.
0000017225 00000 п.
0000017519 00000 п.
0000017999 00000 н.
0000018179 00000 п.
0000018301 00000 п.
0000018817 00000 п.
0000019069 00000 п.
0000019391 00000 п.
0000019460 00000 п.
0000019952 00000 п.
0000020162 00000 п.
0000021238 00000 п.
0000022249 00000 п.
0000022383 00000 п.
0000022445 00000 п.
0000022472 00000 п.
0000023007 00000 п.
0000024125 00000 п.
0000030540 00000 п.
0000031149 00000 п.
0000031521 00000 п.
0000031791 00000 п.
0000036902 00000 п.
0000039754 00000 п.
0000039853 00000 п.
0000039923 00000 н.
0000044630 00000 н.
0000045343 00000 п.
0000050936 00000 п.
0000052496 00000 п.
0000052745 00000 п.
0000052804 00000 п.
0000053439 00000 п.
0000053641 00000 п.
0000053926 00000 п.
0000078099 00000 п.
0000086339 00000 п.
0000088227 00000 п.
0000088304 00000 п.
0000088362 00000 п.
0000088676 00000 п.
0000088779 00000 п.
0000088884 00000 п.
0000089022 00000 н.
0000089150 00000 п.
0000089280 00000 п.
0000089398 00000 п.
0000089545 00000 п.
0000089686 00000 п.
0000089795 00000 п.
0000089969 00000 н.
00000 00000 п.
00000 00000 п.
00000 00000 п.
00000 00000 п.
00000 00000 п.
00000 00000 п.
00000 00000 н.
0000091099 00000 п.
0000091237 00000 п.
0000091371 00000 п.
0000091495 00000 п.
0000091635 00000 п.
0000091755 00000 п.
0000091885 00000 п.
0000092027 00000 н.
0000092155 00000 п.
0000092291 00000 п.
0000092429 00000 п.
0000092551 00000 п.
0000002736 00000 н.
трейлер
] / Назад 1479308 >>
startxref
0
%% EOF
585 0 объект
> поток
hb«`f`g` ̀ L.pneumophila — паразит эукариотических клеток, способный к размножению в самых разных организмах-хозяевах. Во время колонизации, а также внутри хозяина, бактерия имеет ключевые молекулярные особенности, такие как придатки клеточной стенки или специализированные транспортные системы, которые позволяют ей вторгаться и выживать [35, 36]. Хорошо задокументированный пример — система Dot / Icm, которая способна вводить бактериальные белки в эукариотические клетки, которые могут влиять на транспортные функции клетки-хозяина, тем самым играя центральную роль в пролиферации [37].Чтобы улучшить наше видение компонентов, которые лежат на стенке бактериальной клетки или внутри нее, мы предлагаем здесь первую протеомную карту компартмента внешней мембраны L. pneumophila . Кроме того, мы предлагаем карту белковой фракции, доступной для внешней флуоресцентной маркировки, чтобы расшифровать новые молекулярные акторы, которые могут быть задействованы во время контактов хозяин-патоген (Рис. 1). Стратегия мечения белков, экспонируемых на поверхности Недавние усилия по секвенированию и аннотации генома значительно повысили возможности и производительность протеомного анализа.Хотя это не первая область исследования, это удивительно верно для микроорганизмов, для которых сейчас доступно около 1000 геномных последовательностей. Используя протеомные подходы, у нас есть высокоспециализированный метод, позволяющий извлечь выгоду из всего этого количества информации и заметно охарактеризовать гипотетические белки, которые никогда ранее не освещались, даже несмотря на то, что их открытие зависит от качества аннотации генома. Чтобы дать некоторое обоснование нашим экспериментам, мы сначала предлагаем краткую аннотацию аннотации генома L pneumophila [14].Из последнего было обнаружено наличие 2942 открытых рамок считывания, и, согласно PsortB, более 1300 белков остаются с неизвестным субклеточным местоположением. Кроме того, более 1400 других белков являются компонентами вышеупомянутой фракции сферопластов (915 цитоплазматических и 534 в цитоплазматической мембране), а оставшиеся примерно 150 белков принадлежат внешней оболочке. Поиски гомологии завершили эту картину и предложили около 250 белков для внешней оболочки. Оболочка грамотрицательных бактерий состоит из сложной структуры, состоящей из внешней мембраны, периплазматического пространства и цитоплазматической мембраны.Мы сохранили процедуру сферопласта [29], которая после обработки лизоцимом позволяет отделить цитоплазму с окружающей цистоплазматической мембраной от всех внешних частей оболочки (периплазматическое пространство с внешней мембраной). Наружная мембрана состоит из фосфолипидов, мембранных белков, липопротеинов и липополисахаридов. Он ковалентно прикреплен к пептидогликану сплошным слоем мелких липопротеинов [38]. Периплазматическое пространство представляет собой гелеобразный слой, состоящий из растворимых белков, расположенных между внешней и внутренней мембранами, обогащенный протеазами и нуклеазами. Это исследование представляет собой первую всестороннюю попытку охарактеризовать внешние OMPs L. pneumophila с использованием 2-DE. Эти экспериментальные характеристики позволили выделить около 300 белков на двумерных гелях (рис. 2). Из последнего было вырезано 126 белков и успешно идентифицировано 87 белков, соответствующих 65 отдельным белкам (таблица 1). Хорошее разрешение пятен было получено с минимальными штрихами, что указывает на высокую растворимость белка, значительно увеличенную при добавлении поверхностно-активного вещества ASB14 в среду солюбилизации [39].Эта способность улучшать двумерные карты OMP с помощью ASB14 наблюдалась в предыдущей работе с Pseudomonas aeruginosa и Yersiania ruckeri [40–42]. В этих отчетах соотношение белков, принадлежащих периплазматическому пространству / внешней мембране, колеблется от 80 до 90%, что свидетельствует об эффективности обогащения этого протокола экстракции. На этой двумерной карте мы также заметили важное соотношение белков с основной pI по сравнению с содержанием всего белка в соответствии с прогнозом [14].Действительно, средний pI продуктов гена Legionella составляет 7,3 по сравнению со значением 6,9 для E. coli . В частности, многие белки оболочки Legionella или секретируемые белки демонстрируют очень простую pI, такую как компоненты Icm / Dot, металлопротеазы или Mip (примеры значений pI см. В таблице 1). Это наблюдение было функционально коррелировано со способностью бактерий адаптироваться к стрессовой кислой среде, возникающей во время выживания в клетках-хозяевах.Поэтому неудивительно, что такие профили OMP с высоким содержанием белков pI широко представлены. Окрашенная серебром экспериментальная карта двумерного гель-электрофореза, полученная с экстрактом белка внешней мембраны (загрузка белка, 100 мкг белков) Мы идентифицировали всего 40 OMP или периплазматических белков. Из протокола извлечения; не было неожиданностью идентифицировать белки с периплазматической локализацией, которые находятся вне сферопластов.Примечательно, что почти все белки, на которые воздействуют как OMP или периплазматические белки, обладают пептидным сигналом при использовании алгоритма SignalP (Таблица 1). Белок lpg2112, соответствующий белку, индуцированному макрофагами массой 24 кДа, является единственным исключением, и ранее не сообщалось, что он связан с внешней мембраной. Мы логически обнаружили уже описанные белки: TolC, OmpH, Pal, Mip, гомолог FadL (lpg1810), компоненты Icm и ряд основных OMP. Кроме того, мы также охарактеризовали десять белков, классифицированных как гипотетические, но никогда не наблюдаемые экспериментально.В результате поиска по гомологии выяснилось, что эти белки соответствуют полипептидам, которые кажутся уникальными для L. pneumophila (lpg1189, lpg0101, lpg2942, lpg2419, lpg0880, lpg2874, lpg2165). Что касается периплазматических белков, в основном были обнаружены ферменты, например как металлопротеаза, фосфатаза и изомераза, а также периплазматический компонент механизма Icm / Dot (IcmK) и EnhC, белок, участвующий в вирулентности Legionella , который способствует проникновению внутрь клеток-хозяев [43]. В этой фракции снова присутствовали некоторые гипотетические белки. Более неожиданно мы также обнаружили генные продукты, не подозреваемые в наличии в этих белковых экстрактах, например белки, традиционно встроенные во внутреннюю мембрану бактерий, а также шапероны или компоненты, участвующие в трансляции / транскрипции. В первой субпопуляции некоторые белки слабо связаны с внутренней мембраной, и ядро белка указывает на периплазматическое пространство. Так обстоит дело с PPID (lpg0298), белком, задействованным в сворачивании OMP [44]. Похожая схема может быть применена и для других белков, ассоциированных с внутренней мембраной. Кроме того, присутствие шаперонов не было столь неожиданным, поскольку уже сообщалось, что белки, принадлежащие к этому семейству, связаны с внешней мембраной или даже секретируются внеклеточно [41, 42, 45]. Эти данные продемонстрировали, что шапероны непосредственно участвуют в вирулентности и распознавании хозяина. Например, антитела против Hsp60 подавляли адгезию и инвазивность с клетками HeLa двух вирулентных штаммов L. pneumophila Протеомные карты внешней мембраны и экспонированные на поверхности белки Legionella pneumophila с использованием клеточного фракционирования и флуоресцентного мечения
Белки внешней мембраны
Ситуация с рибосомными белками не столь ясна, хотя они также были идентифицированы во фракциях внешней мембраны штаммов Pseudomonas или Yersinia [41, 42]. Интересно, что во всех этих исследованиях был обнаружен один и тот же 50S рибосомный L9. В настоящей работе было обнаружено особенно большое разнообразие рибосомных белков (L9, L11, L7 / L12, L33). Все эти компоненты соответствуют 50S рибосомной субъединице и демонстрируют (для этой субъединицы) самую высокую доступность растворителя в экспериментах по обмену H / D с E.coli [48]. Присутствие этих белков в экстрактах OMP до сих пор остается невыясненным.
Кроме того, присутствовали и другие белки, предположительно цитоплазматические, например глутамин синтетаза (GlnA), которая была обнаружена во многих пятнах с относительно высоким содержанием (пятна 30, 31, 32), вероятно, отражая различные степени модификаций, а также нуклеозиддифосфаткиназу (Ndk, пятно 103). Хотя его основная функция, по-видимому, связана с переносом фосфата между нуклеозидами в цитоплазме, белок Ndk был обнаружен три десятилетия назад в перисплазматической фракции E.coli [49] и, совсем недавно, во фракции мембран P. aeruginosa [50, 51].
Для белков, которые не ожидалось обнаружить во фракции внешней мембраны, в отсутствие дополнительных исследований локализации трудно сделать окончательный вывод об их мембранной локализации, поскольку некоторые из этих белков также присутствуют в большом количестве в цельные белковые экстракты. Однако стоит отметить, что эта работа не является первым доказательством присутствия шаперонов / рибосомных белков во фракции внешней мембраны.
Белки, экспонируемые на поверхности
Технология DIGE изначально была разработана для упрощения процесса обнаружения пятен и идентификации белков с использованием 2-DE, позволяя разделять два разных образца белка в одном и том же двумерном геле с использованием специфических флуоресцентных красителей. Минимальные красители CyDye DIGE Fluor содержат группу, способную взаимодействовать с гидроксисукцинимидным сложным эфиром N и , и предназначены для ковалентного присоединения к аминогруппе ɛ лизина белков посредством амидной связи.В этом исследовании после того, как две целевые популяции белков, а именно поверхностные белки до лизиса клеток и целые белки после лизиса клеток, были независимо помечены, оба образца были смешаны вместе и разделены. Для правильной маркировки бактериальный осадок был получен с помощью низкоскоростного центрифугирования для предотвращения лизиса клеток, который мог бы привести к цитоплазматическому загрязнению. Кроме того, условия, используемые для мечения поверхностных белков, были очень мягкими (т.е. карбонатный буфер при pH 8,5), а время экспозиции флуорофора было относительно коротким (20 мин).Маловероятно, что такое лечение нарушит целостность бактериальных клеток, что может привести к ошибочным наблюдениям.
Флуоресцентное окрашивание проводили на планктонных клетках L. pneumophila в стационарной фазе, а не в экспоненциальной фазе, поскольку ранее было продемонстрировано, что бактерия усиленно экспрессирует факторы вирулентности во время этой фазы роста [52, 53 ]. Бактериальные культуры (50 мл) останавливали после достижения оптической плотности 2, что соответствует 2-дневным культурам.Полученную бактериальную суспензию разделили на две равные аликвоты. Первый использовался перед лизированием для мечения поверхностных белков с помощью Cy5, а второй был использован для мечения всего белкового экстракта с помощью Cy3 после лизирования. Затем каждый образец визуализировали независимо с помощью специального флюороимиджера.
Из-за маркировки Cy5, предназначенной для окрашивания фракции бактериального белка, обнажающей доступные остатки лизина извне, несколько десятков белков четко проявились на двумерном геле (рис.3а). С этого момента 30 пятен были вырезаны и отправлены на идентификацию с помощью масс-спектрометрии. Учитывая, что открытые на поверхности белки не были фракционированы, в отличие от других возможных подходов (см. Обзор Cordwell [54]), белки из экстракта цельных клеток также присутствовали на геле и представляют собой потенциальные загрязнители. Чтобы ограничить это явление, мы скрестили результаты идентификации поверхностных белков с популяцией мембранных белков, описанной выше. Белки, которые присутствовали в обоих анализах, представлены в таблице 2.Очевидно, что при анализе данных масс-спектрометрии были идентифицированы другие белки, принадлежащие к целому белковому экстракту (присутствующие в том же геле), как присутствующие, но они не включены в этот отчет.
Рис. 3Двумерные изображения дифференциального гель-электрофореза белковых экстрактов Legionella pneumophila . На флуоресцентных изображениях показаны два меченых образца: a, , экспонированные на поверхности белки (Cy5) и b, цельный белковый экстракт (Cy3).Эти два образца были смешаны и разделены на одном и том же геле
. Таблица 2 Идентификация белков, соответствующих карте протеома внешней поверхности Legionella pneumophilaСреди меченых белков девять белков были однозначно идентифицированы и уже наблюдались во фракции внешней мембраны: четыре известных OMP, два шаперона и три менее ожидаемых белка, то есть Ndk и два гипотетических белка.Дополнительные независимые эксперименты DIGE показали присутствие других поверхностно-ассоциированных белков, среди которых были Mip и OMP OmpH. Эти белки систематически не наблюдались, вероятно, из-за их относительно высокого pI (9,19 для Mip и 9,33 для OmpH), что также имеет место для экстрактов цельного белка (данные не показаны).
Все эти белки с точки зрения их местоположения представляют собой потенциальные мишени для клинической диагностики или, в более общем смысле, инструменты для бактериального мониторинга.Некоторые из них уже были указаны в предыдущих исследованиях, например OmpH. Этот тримерный белок способен встраиваться в фосфолипидные мембраны in vitro, указывая на то, что он может связываться с фосфолипидами во внешней мембране in vivo для эффективного нацеливания развернутых OMPs на мембрану [55]. Синтетический пептид, имитирующий конформационные эпитопы нативного OmpH, обеспечивает практическую защиту животного-мишени от бактериальной инфекции Pasteurella multocida [56].
Другой хорошо задокументированный пример дают два шаперонина GroEL и GroES. Первоначально обозначенный как цитоплазматический, GroEL (Hsp60) и его регулятор GroES (Hsp10) необходимы для правильной укладки большого количества белков [57, 58]. Но, как обсуждалось выше, эксперименты по иммунолокализации установили роль экспонированного на поверхности Hsp60 в инвазии клеток HeLa L. pneumophila [46]. Другие исследования на различных микроорганизмах также показали, что GroEL играет решающую роль в бактериальной адгезии [59].В начале 1990-х были получены моноклональные антитела против белка L. pneumophila GroEL, которые позволили успешно идентифицировать клинические изоляты Legionella , открыв тем самым путь для их использования в диагностических иммуноанализах [60].
Mip также представляет собой белок, экспонируемый на поверхности. Он необходим для оптимального заражения и проявляет активность PPIase [61]. Mip, вероятно, один из основных факторов вирулентности L. pneumophila , может связываться со сложными молекулярными компонентами внеклеточного матрикса и опосредовать повреждение альвеол и распространение бактерий в легких.Недавняя работа предположила, что Mip может взаимодействовать с недавно секретируемым белком и может активировать белок с помощью его PPIase и / или возможного действия шаперона [62].
Кроме того, в наших анализах не было обнаружено никаких доказательств мечения пептидогликан-ассоциированного липопротеина (Pal), хотя он присутствует в относительно высоком количестве на двумерных картах внешней мембраны. Тем не менее, белок Pal 19 кДа L. pneumophila был секвенирован и охарактеризован как наиболее известный поверхностный антиген [63].Совсем недавно этот Pal-антиген массой 19 кДа видов Legionella был исследован как потенциальный диагностический антиген мочи для болезни легионеров [64]. Анализ аминокислотного состава этого белка показывает, что он содержит небольшое количество (например, шесть) остатков лизина по сравнению с идентифицированными белками, экспонируемыми на поверхности (например, 17 остатков лизина для белка, индуцированного 24 кДа). Возможно, кроме того, эти несколько лизинов не могут быть помечены извне бактериями.Важно отметить, что это ограничение может также применяться к другим белкам, имеющим аналогичные характеристики.
Напротив, в этом исследовании были идентифицированы белки, которые еще не описаны в Legionella , локализованные на поверхности, например, длинноцепочечный транспортер жирных кислот (lpg1810). Учитывая энергетические затраты на синтез жирных кислот и необходимость получения незаменимых жирных кислот из окружающей среды, транспорт длинноцепочечных жирных кислот обязательно должен представлять собой фундаментальный биологический процесс (см. Обзор DiRusso и Black [65]).Определенные мембраносвязанные и связанные с мембраной транспортные белки жирных кислот были идентифицированы и охарактеризованы у многих бактерий. Внутри внешнего листка оболочки этот переносчик способен связывать жирные кислоты с высоким сродством, и поэтому сайты связывания жирных кислот, вероятно, доступны извне [66].
В том же семействе белков были обнаружены другие полипептиды: основной белок, индуцированный макрофагами массой 24 кДа, Ndk и два гипотетических белка (lpg2874 и lpg0634). Первое подтверждено сравнением двумерных паттернов белков, полученных из зрелых внутриклеточных форм и культур стационарной фазы Legionella .Наблюдались многочисленные различия в белках и, в частности, резкое увеличение уровней этого белка массой 24 кДа, также называемого MagA [67]. Случай Ndk описан выше [49, 68]. Местоположение двух гипотетических белков остается неясным, поскольку они уникальны для L. pneumophila . PsortB предсказал lpg2874 как возможный компонент внешней мембраны и не смог предсказать местоположение lpg0634. При поиске гомологов в бактериальных геномах единственные значимые совпадения были обнаружены в родственных L.pneumophila штамм Paris. Это наблюдение весьма интересно, потому что, если будет подтверждено расположение этих белков на бактериальной поверхности, они будут представлять собой очень специфическую сигнатуру для распознавания.
Респираторное заболевание шаровых питонов (Python regius), экспериментально инфицированных нидовирусом шарового питона
Основные моменты
- •
Мы продемонстрировали, что нидовирусы вызывают респираторные заболевания у шаровых питонов.
- •
Муцинозное хроническое воспаление и пролиферативная интерстициальная пневмония являются типичными.
- •
Инфекционный вирус в секретах полости рта и фекалиях указывает на возможные пути передачи.
- •
Хоанальные и оральные / пищеводные мазки являются хорошими образцами для прижизненной диагностики.
- •
Родственные нидовирусы у ящериц и крупного рогатого скота также связаны с респираторными заболеваниями.
Abstract
Косвенные доказательства связывают новую группу нидовирусов с респираторными заболеваниями питонов, ящериц и крупного рогатого скота.Мы провели экспериментальные исследования по заражению шаровых питонов ( Python regius ), чтобы проверить гипотезу о том, что инфекция, вызванная нидовирусом питона (BPNV), вызывает респираторные заболевания. Три шаровых питона были инокулированы перорально и интратрахеально изолированным BPNV из культуры клеток, а два были инокулированы ложно. Прижизненные мазки из хоан, пищевода и клоаки, а также посмертные ткани инфицированных змей были положительными на вирусную РНК, белок и инфекционный вирус с помощью qRT-PCR, иммуногистохимии, вестерн-блоттинга и выделения вируса.Клинические признаки включали покраснение слизистой оболочки полости рта, обильное выделение слизи, дыхание с открытым ртом и анорексию. Гистологические поражения включали хронический активный муцинозный ринит, стоматит, трахеит, эзофагит и пролиферативную интерстициальную пневмонию. Контрольные змеи оставались отрицательными и не имели клинических признаков на протяжении всего эксперимента. Наши результаты устанавливают причинно-следственную связь между нидовирусной инфекцией и респираторными заболеваниями у шаровых питонов и проливают свет на прогрессирование и передачу заболевания.
Ключевые слова
Ball python
Нидовирус
Экспериментальная инфекция
Респираторные заболевания
Пневмония
Torovirinae
Барнивирус
Barnivirus
000 Авторские статьи
000 Авторские статьи Опубликовано Elsevier Inc.
Рекомендуемые статьи
Цитирование статей
У вас недостаточно прав для чтения этого закона в настоящее время
У вас недостаточно прав для чтения этого закона в настоящее время Логотип Public.Resource.OrgЛоготип представляет собой черно-белую линию улыбающегося тюленя с усами. Вокруг печати находится красная круглая полоса с белым шрифтом, в верхней половине которого написано «Печать одобрения», а в нижней части — «Public.Resource.Org». На внешней стороне красной круглой марки находится круг. серебряная круглая полоса с зубчатыми краями, напоминающая печать из серебряной фольги.Public.Resource.Org
Хилдсбург, Калифорния, 95448
Соединенные Штаты Америки
Этот документ в настоящее время недоступен для вас!
Уважаемый гражданин:
В настоящее время вам временно отказано в доступе к этому документу.
Public Resource ведет судебный процесс за ваше право читать и говорить о законе. Для получения дополнительной информации см. Досье по рассматриваемому судебному делу:
.Американское общество испытаний и материалов (ASTM), Национальная ассоциация противопожарной защиты (NFPA), и Американское общество инженеров по отоплению, холодильной технике и кондиционированию воздуха (ASHRAE) против Public.Resource.Org (общедоступный ресурс), DCD 1: 13-cv-01215, Объединенный окружной суд округа Колумбия [1]
Ваш доступ к этому документу, который является законом Соединенных Штатов Америки, был временно отключен, пока мы боремся за ваше право читать и говорить о законах, по которым мы решаем управлять собой как демократическим обществом.
Чтобы подать заявку на получение лицензии на ознакомление с этим законом, ознакомьтесь с Сводом федеральных правил или применимыми законами и постановлениями штата. на имя и адрес продавца. Для получения дополнительной информации о постановлениях правительства и ваших правах гражданина в соответствии с нормами закона , тел. пожалуйста, прочтите мое свидетельство перед Конгрессом Соединенных Штатов. Вы можете найти более подробную информацию о нашей деятельности на общедоступных ресурсах. в нашем реестре деятельности за 2015 год. [2] [3]
Спасибо за интерес к чтению закона.Информированные граждане — это фундаментальное требование для работы нашей демократии.