Русский язык 7 класс мерзляк: ГДЗ упражнение 88 русский язык 7 класс Баранов, Ладыженская

• Предметы
• Русский язык

1. Причастие

   1. Причастие как особая форма глагола

   2. Образование причастий

   3. Правописание причастий

   4. Синтаксическая функция причастий

   5. Причастный оборот

2. Деепричастие

   1. Деепричастие как особая форма глагола

   2. Правописание деепричастий

   3. Употребление деепричастного оборота

3. Наречие

   1. Наречие как часть речи

   2. Правописание наречий

   3. Наречие и другие части речи

4. Предлог

   1. Предлог как служебная часть речи

   2. Виды предлогов и их правописание

5. Союз

   1. Союз как служебная часть речи

   2. Виды союзов

6. Частица

   1. Частица как служебная часть речи

   2. Отрицательные частицы

   3. Правописание частиц

Домашня робота з русский язык 7 класс

Скачать домашня робота з русский язык 7 класс PDF

Русский язык 7 класс. Тематический контроль Александров, Цыбулько Национальное образование. Русский язык 7 класс Александрова Просвещение. Русский язык 7 класс Рыбченкова, Александрова Просвещение. Русский язык 7 класс. ФГОС Ладыженская, Баранов Просвещение. Русский язык 7 класс Быстрова Русское Слово.

Зачетные работы по русскому языку 7 класс. Аксенова. К учебнику Баранова Экзамен.  Решебники по русскому языку просто необходимы родителям при проверке домашних заданий своих детей. Контроль будет быстрым и правильным, что позволит сэкономить немало времени и использовать его для отдыха или выполнения более важных дел. Сложность русского языка неоспорима. Мы разместили переработанные ответы к учебнику по русскому языку за седьмой класс авторов Баранов М.Т., Ладыженская Т.А., Тростенцова Л.А.

года выпуска. Это готовое домашнее задание по русскому языку поможет с решением многих заданий по русскому языку за 7 класс. Использовать ГДЗ по русскому языку за 7 класс можно по-разному. Мы предлагаем максимально разумный и продуктивный подход. Если семиклассник не может самостоятельно сделать упражнение, можно подсмотреть алгоритм в ответах и попробовать хотя бы часть задания выполнить по нему. Если все слишком сложно, то стоит на готовом примере рассмотреть последовательность решения и разобраться во всех этапах.

Родители могут подключиться к процессу и объяснить непонятные моменты. Чтобы закрепить результат, можно по такому же методу сделать похожее задание. Если родители каждый вечер проверяют домашнюю работу. ГДЗ(готовые домашние задания), решебник онлайн к учебникам и к рабочим тетрадям по русскому языку за 7 класс.  Русский язык — не сложный, но очень нужный предмет в школе. Но всё же многим школьникам очень сложно усваивать данный предмет, поэтому они прибегают за помощью к ГДЗ. ГДЗ по русскому языку для 7 класса поможет всем ученикам усваивать данный предмет на отлично!

Одни ученики могут проверять правильность решённых ими задач и упражнений, другие могут просто списать и понять, как решается данное упражнение. Пользуйся нашим ГДЗ, старайся понимать, как решается та или иная задача, и ты без проблем сможешь решать самостоятельные и контрольные работы. Готовое домашние задание из решебников по русскому языку седьмого класса. Рабочая и лабораторные тетради по русскому языку пошаговые решения для России, Украины, Белоруссии.  Русский язык за 7 класс.

Русский язык. 7 класс. Баранов М. Т., Ладыженская Т. А., Тростенцова Л. A. г. Авторы: Баранов М.Т., Ладыженская Т.А., Тростенцова Л.А., Издательство: Страна: Русский язык. 7 класс. Баранов М. Т., Ладыженская Т. А., Тростенцова Л. А. г. Авторы: Баранов М.Т., Ладыженская Т.А., Тростенцова Л.А., Издательство: Страна: Русский язык. 7 класс. Мурин Л. А., Волынец Т. Н., Долбик Е. Е. и др. г.

Решебники по русскому языку в седьмом классе. Наш портал стремится помочь всем семиклассникам лучше понимать этот предмет со всеми его сложностями. Именно для этого мы создали раздел решебники 7 класс русский язык, чтобы школьник смог найти нужный ему решебник к учебнику с его школьной программы и без особого труда проверил свою выполненную домашнюю работу.

Проверь домашнее задание в любой момент. В раздел ГДЗ 7 класс русский язык можно попасть со своего мобильного устройства. Будь-то мобильный телефон или планшет, ты всегда сможешь посетить наш сайт и проверить каждое выполненное тобой упражн. Подробные решения и ГДЗ по русскому языку за 7 класс к вашему учебнику и рабочей тетради.  Главная Готовые домашние задания. Главная ГДЗ 7 класс Русский язык. Русский язык 7 класс. Русский язык 7 класс. Учебник. Ладыженская, Баранов, Тростенцова. «Просвещение».

Русский язык 7 класс. Учебник. Волынец, Литвинко, Долбик. «Национальный институт образования». Русский язык 7 класс.

Алгоритм успеха. Учебник. Шмелев, Флоренская, Савчук. «Вентана-Граф». Русский язык 7 класс. Учебник. Разумовская, Львова, Капинос. «Дрофа». Русский язык 7 класс. Учебник. Львова, Львов. «Мнемозина». Русский язык 7 класс. Учебник. Баранов, Ладыженская. «Просвещение». От семиклассников на уроках русского языка учителя уже требуют писать сочинения-рассуждения, выступать с докладами перед аудиторией, соблюдая орфоэпические и стилистические нормы.

Объем домашних работ возрастает. Чтобы ребятам не пришлось отрывать время от сна на выполнение заданий, стоит воспользоваться ГДЗ по русскому языку 7 класс. Ученикам выгодно использовать составленный для конкретного учебника решебник в разных обстоятельствах: Если школьник болел, ГДЗ позволит самостоятельно изучить пропущенный материал.

Похожее:

Русский язык 7. Контрольные словарные работы

Русский язык 7. Контрольные словарные работы (осложнённое списывание) для УМК Ладыженская, Баранов, Тростенцова с ОТВЕТАМИ. В учебных целях использованы цитаты из пособия «Русский язык 7 класс: Контрольные и диагностические работы / И.В. Текучёва. — Москва: ACT: Астрель», которое используется в комплекте с учебником Т.А. Ладыженской и др. «Русский язык. 7 класс».

Русский язык 7 класс.

1. Повторение изученного в 5—6 классах

ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ:

1. Въехать, барьер, заячьи, объектив, шью, бульон, адъютант, сэкономить, поправляться, оглядывается, вертеться, обжечь, откроешь, борщ, остров сокровищ, фальшь, увлечься, познакомься, товарищ, объявление, субъект, моется, полночь, павильон, расстраиваться.
2. Чёрный, бережёшь, плечом, увлечёт, крыжовник, речонка, жёлудь, шорох, зачёркивать, холщовый, печёнка, жёсткий, галчонок, дирижёр, колпачок, печёшь, мышонок, падежом, пирожок.
3. Непрерывный, беспрестанный, непримиримый, непритязательный, прибрежные, превратиться, притвориться, приукрашивать, преклоняться, радиоприёмник, прервался, предатель, приехать, приоткрыть, прилежный, привилегии.
4. Приласкать, усложнить, облокотиться, поглощать, отказаться, зарядить, заглядение, зачарованный, непримиримость, старожил, удивление, укорениться, привлекательный.
5. Загорелый, прикосновение, расти, предполагать, протирать, блестящий, расстилаться, предложить, пловец, заря, поросль, замереть, изложение, равнина, проскакать, скачок, сравнение, блистательный, предложить, прикосновение, скакун, озарить, склониться, избиратель, постелить.

2. Причастие

ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ:

6. Дышащий ароматом моря воздух, рокочущий самолёт, мечущийся огонёк, гонящийся за мышонком кот, пышущий злобой начальник, предвидящий последствия человек, стелющийся по земле снег, зависящее от обстоятельств поведение, ненавидящий болезни пациент, выздоравливающий больной.
7. Огненный, песчаный, искусственный, революционный, ураганный, лебединый, овсяный, безветренный, бесчисленные, ледяной, каменный, печёный картофель, раненый солдат, серебряный, закопченные стены, погашенный костёр, мощёная улица, кожаная куртка.
8. Давно просмотренный фильм, квашеная капуста, копчёная колбаса, уязвлённое самолюбие, обожжённое солнцем лицо, испечённый бабушкой пирог, некошеный луг, занесённая в Красную книгу птица, крашеный пол, золочёные ложки, слоёный пирожок.
9. Невыспавшийся младенец, недооценённый современниками поэт, не прекращавшийся весь день дождь, непросохшая одежда, ничего не значащий вид, не довязанный старушкой свитер, ещё не напечатанный роман, всё ещё не тронутая человеком природа, давно не подметавшиеся улицы, необъяснимые свойства атома.

3. Деепричастие

ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ:

10. Ушёл, ни с кем не простясь; никого не замечая; ничему не удивляясь; не засыпая ни на минуту; не проявляя интереса; не знакомясь ни с кем; без конца неистовствуя; согласился с готовностью, не упрямствуя; не достав до потолка.

4. Наречие

ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ:

11. Учить наизусть; встать на голову; поговорить начистоту; пробираться в потёмках; отрезать на глаз; скрыться под шумок; трудиться в одиночку; недоумённо посмотреть; неожиданно подбежать; наесться досыта; повернуть налево; говорить по-английски; пуститься вскачь; упасть навзничь.

5. Предлог

ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ:

12. Вследствие сильного дождя; беспокоиться насчёт поездки; в связи с отъездом; несмотря на снег, мы отправились за покупками; в заключение следует сказать; в продолжении романа известного автора; в течение пяти лет; иметь в виду ряд обстоятельств; в продолжение месяца; во время урока; прийти вовремя.

6. Союз

ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ:

13. Подумать, чтобы не сказать лишнего; подумать, что бы такое сказать; знать, чтобы не покупать некачественные товары; нужно переписать текст, а также его выучить; она так же красива, как и прежде; мы приехали, чтобы отдохнуть; родители тоже прилетели в среду утром.

7. Частица

ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ:

14. Неприятель, недооценить, несмотря на усталость, неорганизованная вовремя экскурсия, не слышно ни звука, не было ни одной монеты, никто, непросохшее бельё; не умеет ни говорить, ни спорить; ни вперёд, ни назад; совсем неподготовленное задание.

8. Повторение и систематизация изученного в 5—7 классах

ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ:

15. Рассказать об авиации, побывать на море, ошибка в речи, заниматься в библиотеке, работать в лаборатории, к нашей большой радости, в большом музее, тихо дремлет, красиво пишет, постепенно уменьшается, хорошо держишься, быстро вяжет, скачет по полю, напрасно беспокоишься, поищешь у себя дома.
16. Автопробег, северо-восток, рыба-пила, жизнеописание, дом-музей, русско-английский, горько-солёный, водопроводная, красно-жёлтый, черноглазый, кое-кому, не с кого, что-то, какая-нибудь.
17. Посмотреть невнимательно; вскочить испуганно; переписать начисто; жить по-старому; пуститься вскачь; идти впереди группы; несмотря на препятствия; обречённо вздохнуть; невесело рассмеяться; подойти справа; вернуться издалека; в продолжение года.

Русский язык 7. Контрольные словарные работы (осложнённое списывание) для УМК Ладыженская, Баранов, Тростенцова с ОТВЕТАМИ. В учебных целях использованы цитаты из пособия «Русский язык 7 класс: Контрольные и диагностические работы / И.В. Текучёва. — Москва: ACT: Астрель», которое используется в комплекте с учебником Т.А. Ладыженской и др. «Русский язык. 7 класс».

ГДЗ по русскому языку 7 класс Ладыженская, Баранов к номерам списать бесплатно.

Задание №1 «Проверь себя» в тестовой форме:

Вопросы к §4; 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 Вопросы к §5; 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 Вопросы к §6; 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258 259 260 Вопросы к §7; 261 262 263 264 265 266 267 268 269 270 271 272 273 274 275 276 277 278 279 280 281 282 283 284 285 286 287 288 289 290 291 Вопросы к §8; 292 293 294 295 296 297 298 299 300 301 302 303 304 305 306 307 308 309 310 311 312 313 314 315 316 317 318 319 320 321 322 323 324 325 326 327 328 329 330 331 332 333 334 335 336 337 338 339 340 341 342 343 344 345 346 347 348 349 350 351 352 353 354

Задание №2 «Проверь себя» в тестовой форме:

Вопросы к §10; 355 356 357 358 359 360 361 362 363 364 365 366 367 368 369 370 371 372 373 374 375 376 377 378 379 380 381 382 383 384 385 386 387 388 389 390 391 Вопросы к §11; 392 393 394 395 396 397 398 399 400 401 402 403 404 405 406 407 408 409 410 411 412 413 414 415 416 417 418 419 420 421 422 423 424 425 426 427 428 429 430 431 432 Вопросы к §12; 433 434 435 436 437 438 439 440 441 442 443 444 445 446 447 448 449 450 451 452 453 454 455 456 457 458 459 460 461 462 463 464 465 466 467 468 469 470 471 472 473 474 475 476 477 478 479 480 481 482 483 484 485 486 487 488 489 490 491 492 493 494 495 496 497 498

Задание №3 «Проверь себя» в тестовой форме:

Вопросы к §14; 499 500 501 502 503 504 505 506 507 508 509 510 511 512 513 514 515 516 517 518 519 520 521 522 523 524 525 526 527 528 529 530 531 532 Вопросы к §15; 533 534 535 536 537 538 539 540 541 542 543 544 545 546 547 548 549 550 551 552 553 554 555 556 557 558 559 560 561 562 563 564 565 566 Вопросы к §16; 567 568 569 570 571 572 573 574 575 576 577 578 579 580 581 582 583 584 585 586 587 588 589 590 591 592 593 594 595 596 597 598 599 600 601 602 603 604 605 606 607 608 609 610 611 612 613 614 615 616 617 618 619 620 621 622 623 624 625 626 627 628 629 630 631 632 633 634 635 636 637 638 639 640 641 642 643 644 645 646 647 648 649 650 651 652 653 654 655 656 657 658 659 660 661 662 663 664 665 666 667 668 669 670 671 672 673 674

Задание №4 «Проверь себя» в тестовой форме:

Вопросы к §18; 675 676 677 678 679 680 681 682 683 684 685 686 687 688 689 690 691 692 693 694 695 696 697 698 699 700 701 702 703 704 705 706 707 708 709 710 711 712 713 714 715 716 717 718 719 720 721 722 723 724 725 726 727 728 729 730 731 732 733 734 735 736 737 738 739 740 741 742 743 744 745 746 747 748 749 750 751 752

Задание №5 «Проверь себя» в тестовой форме:

Вопросы к §20; 753 754 755 756 757 758 759 760 761 762 763 764 765 766 767 768 769 770 771 772 773 774 775 776 777 778 779 780 781 782 783 784 785 786 787 788 Вопросы к §21; 789 790 791 792 793 794 795 796 797 798 799 800 801 802 803 804 805 806 807 808 809 810 811 812 813 814 815 816 817 818 819 820 Вопросы к §22; 821 822 823 824 825 826 827 828 829 830 831 832 833 834 835 836 837 838 839 840 841 842 843 844 845 846 847 848 Вопросы к §23; 849 850 851 852 853 854 855 856 857 858 859 860 861 862 863 864 865 866 867 868 869 870 871 872 873 874 875 876 877 878 879 880 881 882 883 884 885 886 887 888 889 890 891 892 893 894 895 896 897 898 899 900 901 902 903 904 905 906 907 908

Задание №6 «Проверь себя» в тестовой форме:

Вопросы к §24; 909 910 911 912 913 914 915 916 917 918 919 920 921 922 923 924 925 926 927 928 929 930 931 932 933 934 935 936 937 938 939 940 941 942 943 944 945 946 947 948 949 Вопросы к §25; 950 951 952 953 954 955 956 957 958 959 960 961 962 963 964 965 966 967 968 969 970 971 972 973 974 975 976 977 978 979 980 981 982 983 984 985 986 987 988 989 990 991 992 993 994 995 996 997 998 999 1000 1001 1002 1003 1004 1005 1006 Вопросы к §26; 1007 1008 1009 1010 1011 1012 1013 1014 1015 1016 1017 1018 1019 1020 1021 1022 1023 1024 1025 1026 1027 1028 1029 1030 1031 1032 1033 1034 1035 1036 1037 1038 1039 1040 1041 1042 1043 1044 1045 1046 1047 1048 1049 1050 1051 1052 1053 1054 1055 1056 1057 1058 1059 1060 1061 1062 1063 1064 1065 1066 1067 1068 1069 1070 1071 1072 1073 1074 1075 1076 1077 1078 1079 1080 1081 1082 1083 1084 1085 1086 1087 1088 1089 1090 1091 1092 1093 1094 1095 1096 1097 1098 1099 1100 1101 1102 1103 1104 1105 1106 1107 1108 1109 1110 1111 1112 1113 1114 1115 1116 1117 1118 1119 1120 1121 1122 1123 1124 1125 1126 1127 1128 1129 1130 1131 1132 1133 1134 1135 1136 1137 1138

Задание №7 «Проверь себя» в тестовой форме:

1139 1140 1141 1142 1143 1144 1145 1146 1147 1148 1149 1150 1151 1152 1153 1154 1155 1156 1157 1158 1159 1160 1161 1162 1163 1164 1165 1166 1167 1168 1169 1170 1171 1172 1173 1174 1175 1176 1177 1178 1179 1180 1181 1182 1183 1184 1185 1186 1187 1188 1189 1190 1191 1192 1193 1194 1195 1196 1197 1198 1199 1200 1201 1202 1203 1204 1205 1206 1207 1208 1209 1210 1211 1212 1213 1214 1215 1216 1217 1218 1219 1220 1221 1222 1223 1224 1225 1226 1227 1228 1229 1230 1231 1232 1233 1234 1235

Дистанционное зондирование | Бесплатный полнотекстовый | Дистанционно контролируемая экологическая защита и построение схемы безопасности: сравнительный анализ Пингтана (Китай) и Дурбана (Южная Африка)

Вклад авторов

Концептуализация, Q.L. и J.S .; курирование данных, Q.L. и J.S .; формальный анализ, Q.L., J.S. и A.E .; привлечение финансирования, J.S., X.L., J.W., E.K. и A.T .; расследование, Q.L .; методология, Q.L., A.E., J.S. и X.L .; администрация проекта, J.S., X.L., J.W., E.K. и А.Т .; ресурсы, Q.L., J.S. и X.L .; программное обеспечение, Q.L .; надзор, J.S., X.L. и Q.L .; проверка, Q.L., A.E., J.S. и X.L .; визуализация, Q.L .; письменная — оригинальный черновик, Q.L .; написание — просмотр и редактирование, Q.L., A.E., J.S., X.L., J.W., E.K. и А. Все авторы прочитали и согласились с опубликованной версией рукописи.

Рисунок 1. Географическое положение области исследования. ( a ) Географическое положение острова Пингтан (изображение дистанционного зондирования отображается полосой 5, 4 и 3 на спутнике Landsat 8 oli в цветном синтезе, красная часть представляет собой лесную территорию, а время съемки — апрель 2017 г.) ( b ) Географическое положение Дурбана (изображение дистанционного зондирования отображается полосой 5, 4 и 3 Landsat 8 oli в цветном синтезе, а красная часть представляет собой лесную территорию, а время съемки — июнь 2017 г.).

Рисунок 1. Географическое положение области исследования. ( a ) Географическое положение острова Пингтан (изображение дистанционного зондирования отображается полосой 5, 4 и 3 на спутнике Landsat 8 oli в цветном синтезе, красная часть представляет собой лесную территорию, а время съемки — апрель 2017 г.) ( b ) Географическое положение Дурбана (изображение дистанционного зондирования отображается полосой 5, 4 и 3 Landsat 8 oli в цветном синтезе, а красная часть представляет собой лесную территорию, а время съемки — июнь 2017 г.).

Рисунок 2. Блок-схема разграничения границ экологической защиты.

Рисунок 2. Блок-схема разграничения границ экологической защиты.

Рисунок 3. Индекс оценки функции экосистемных услуг. ( a ) Результаты эрозии почвы Пингтана. ( b ) Результаты качества среды обитания в Пингтане. ( c ) Результаты секвестрации углерода в Пингтане. ( d ) Результаты эрозии почвы Дурбана.( e ) Результаты оценки качества среды обитания в Дурбане. ( f ) Результаты секвестрации углерода в Дурбане.

Рисунок 3. Индекс оценки функции экосистемных услуг. ( a ) Результаты эрозии почвы Пингтана. ( b ) Результаты качества среды обитания в Пингтане. ( c ) Результаты секвестрации углерода в Пингтане. ( d ) Результаты эрозии почвы Дурбана. ( e ) Результаты оценки качества среды обитания в Дурбане. ( f ) Результаты секвестрации углерода в Дурбане.

Рисунок 4. Индекс оценки экологической чувствительности Pingtan.

Рисунок 4. Индекс оценки экологической чувствительности Pingtan.

Рисунок 5. Индекс оценки экологической чувствительности Дурбана.

Рисунок 5. Индекс оценки экологической чувствительности Дурбана.

Рисунок 6. Результаты экологической чувствительности. ( a ) Результаты экологической чувствительности Pingtan. ( b ) Результаты экологической чувствительности Дурбана.

Рисунок 6. Результаты экологической чувствительности. ( a ) Результаты экологической чувствительности Pingtan. ( b ) Результаты экологической чувствительности Дурбана.

Рисунок 7. Красная линия острова Пингтан. ( a ) Граница экологической защиты острова Пингтан, основанная на функции экосистемных услуг. ( b ) Граница экологической защиты острова Пингтан, основанная на экологической чувствительности. ( c ) Красная линия острова Пингтан.

Рисунок 7. Красная линия острова Пингтан. ( a ) Граница экологической защиты острова Пингтан, основанная на функции экосистемных услуг. ( b ) Граница экологической защиты острова Пингтан, основанная на экологической чувствительности. ( c ) Красная линия острова Пингтан.

Рисунок 8. Дурбан Экологическая красная линия. ( a ) Граница экологической защиты Дурбана, основанная на функции экосистемных услуг. ( b ) Граница экологической защиты Дурбана, основанная на экологической чувствительности.( c ) Красная линия Дурбана.

Рисунок 8. Дурбан Экологическая красная линия. ( a ) Граница экологической защиты Дурбана, основанная на функции экосистемных услуг. ( b ) Граница экологической защиты Дурбана, основанная на экологической чувствительности. ( c ) Красная линия Дурбана.

Рисунок 9. Результаты анализа MSPA. ( a ) Результаты анализа MSPA Pingtan. ( b ) Результаты анализа MSPA Дурбана.

Рисунок 9. Результаты анализа MSPA. ( a ) Результаты анализа MSPA Pingtan. ( b ) Результаты анализа MSPA Дурбана.

Рисунок 10. Результат добычи экологических источников. ( а ) Результат добычи экологических источников Пинтань. ( b ) Результат добычи экологических источников Дурбана.

Рисунок 10. Результат добычи экологических источников. ( a ) Результат добычи экологических источников Пинтань.( b ) Результат добычи экологических источников Дурбана.

Рисунок 11. Возможные экологические коридоры. ( a ) Потенциальные экологические коридоры Пинтана. ( b ) Возможные экологические коридоры Дурбана.

Рисунок 11. Возможные экологические коридоры. ( a ) Потенциальные экологические коридоры Пинтана. ( b ) Возможные экологические коридоры Дурбана.

Рисунок 12. Строительство экологических коридоров.( а ) Строительство экологических коридоров Пинтань. ( б ) Строительство экологического коридора Дурбана.

Рисунок 12. Строительство экологических коридоров. ( а ) Строительство экологических коридоров Пинтань. ( б ) Строительство экологического коридора г. Дурбан.

Рисунок 13. Результаты Красно-краевого вегетационного индекса. ( a ) Результаты индекса растительности с нормализованной разницей по красному краю (NDVIred-edge) в Пингтане.( b ) Результаты модифицированного индекса простого коэффициента красного края (MSRred-edge) Pingtan. ( c ) Индекс красного края хлорофилла (CIred-edge) результаты Pingtan. ( d ) новый индекс хлорофилла с перевернутым красным краем (IRECI) Пингтана.

Рисунок 13. Результаты Красно-краевого вегетационного индекса. ( a ) Результаты индекса растительности с нормализованной разницей по красному краю (NDVIred-edge) в Пингтане. ( b ) Результаты модифицированного индекса простого коэффициента красного края (MSRred-edge) Pingtan.( c ) Индекс красного края хлорофилла (CIred-edge) результаты Pingtan. ( d ) новый индекс хлорофилла с перевернутым красным краем (IRECI) Пингтана.

Рисунок 14. Индекс растительности зоны экологического очага.

Рисунок 14. Индекс растительности зоны экологического очага.

Рисунок 15. Образец экологической безопасности. ( a ) Образец экологической безопасности города Пинтань. ( b ) Схема экологической безопасности Дурбана.

Рисунок 15. Образец экологической безопасности. ( a ) Образец экологической безопасности города Пинтань. ( b ) Схема экологической безопасности Дурбана.

Таблица 2. Система оценок индекса экологической защиты Redline.

Таблица 2. Система оценок индекса экологической защиты Redline.

Таблица 3. Стандарт выставления оценок и вес факторов оценки экологической чувствительности.

Таблица 3. Стандарт выставления оценок и вес факторов оценки экологической чувствительности.

Таблица 4. Коэффициент относительного сопротивления перемещению вида.

Таблица 4. Коэффициент относительного сопротивления движению вида.

Таблица 5. Индексы растительности Red-edge и формулы расчета.

Таблица 5. Индексы растительности Red-edge и формулы расчета.

Таблица 6. Статистика экологически чувствительной территории.

Таблица 6. Статистика экологически чувствительной территории.

Таблица 7. Статистика различных типов ландшафта.

Таблица 7. Статистика различных типов ландшафта.

Таблица 8. Матрица важности патчей на основе гравитационной модели Пингтана.

Таблица 8. Матрица важности патчей на основе гравитационной модели Пингтана.

Таблица 9. Доля площадей типов землепользования с разной шириной коридора Пингтана.

Таблица 9. Доля площади типов землепользования с разной шириной коридора Пингтана.

Таблица 10. Матрица важности заплат на основе гравитационной модели Дурбана.

Таблица 10. Матрица важности заплат на основе гравитационной модели Дурбана.

Таблица 11. Доля площади типов землепользования с разной шириной коридора Дурбана.

Таблица 11. Доля площади типов землепользования с разной шириной коридора Дурбана.

Таблица 12. Среднее значение вегетационного индекса для разных типов земель.

Таблица 12. Среднее значение вегетационного индекса для разных типов земель.

Таблица 13. Среднее значение индекса растительности в различных экологических источниках.

Таблица 13. Среднее значение индекса растительности в различных экологических источниках.

Зависимое от поля влияние краун-эфира (18-краун-6) на ионную проводимость каналов α-гемолизина

Biophys J. 2004 Nov; 87 (5): 3162–3171.

Сергей М. Безруков

^* Лаборатория физической и структурной биологии, Национальный институт здоровья детей и развития человека, Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд 20892 США; ^† Кафедра биофизики и радиобиологии, Федеральный университет Пернамбуку, Ресифи, Бразилия; и ^‡ Лаборатория математических и статистических вычислений, Центр информационных технологий, Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд 20892 США

Олег В.Красильников

^* Лаборатория физической и структурной биологии, Национальный институт здоровья детей и развития человека, Национальные институты здоровья, Бетесда, Мэриленд 20892 США; ^† Кафедра биофизики и радиобиологии, Федеральный университет Пернамбуку, Ресифи, Бразилия; и ^‡ Лаборатория математических и статистических вычислений, Центр информационных технологий, Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд 20892 США

Лилия Н.Юлдашева

^* Лаборатория физической и структурной биологии, Национальный институт здоровья детей и развития человека, Национальные институты здоровья, Бетесда, Мэриленд 20892 США; ^† Кафедра биофизики и радиобиологии, Федеральный университет Пернамбуку, Ресифи, Бразилия; и ^‡ Лаборатория математических и статистических вычислений, Центр информационных технологий, Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд 20892 США

Александр М.Бережковский

^* Лаборатория физической и структурной биологии, Национальный институт здоровья детей и развития человека, Национальные институты здоровья, Бетесда, Мэриленд 20892 США; ^† Кафедра биофизики и радиобиологии, Федеральный университет Пернамбуку, Ресифи, Бразилия; и ^‡ Лаборатория математических и статистических вычислений, Центр информационных технологий, Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд 20892 США

Клаудио Г.Родригес

^* Лаборатория физической и структурной биологии, Национальный институт здоровья детей и развития человека, Национальные институты здоровья, Бетесда, Мэриленд 20892 США; ^† Кафедра биофизики и радиобиологии, Федеральный университет Пернамбуку, Ресифи, Бразилия; и ^‡ Лаборатория математических и статистических вычислений, Центр информационных технологий, Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд 20892 США

^* Лаборатория физической и структурной биологии, Национальный институт здоровья детей и развития человека, Национальные институты здравоохранения , Бетесда, Мэриленд 20892 США; ^† Кафедра биофизики и радиобиологии, Федеральный университет Пернамбуку, Ресифи, Бразилия; и ^‡ Лаборатория математических и статистических вычислений, Центр информационных технологий, Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд 20892 США

Поступило 19 апреля 2004 г .; Принято 19 августа 2004 г.

Abstract

Замыкание линейного полиэтиленгликоля (ПЭГ) в круговую «корону» кардинально меняет его динамику в канале α -гемолизина.В электрически нейтральном краун-эфире (C ₂ H ₄ O) ₆ шесть мономеров этиленоксида связаны в круг, который придает молекуле способность образовывать комплекс с ионами и увеличивает ее жесткость. Как и в случае с линейным ПЭГ, добавление коронки в раствор для омывания мембраны снижает ионную проводимость канала и создает дополнительный шум проводимости. Однако, в отличие от линейного ПЭГ, как снижение проводимости (сообщение о разделении коронки в поре канала), так и шум (сообщение о динамике коронки в поре) теперь сильно и немонотонно зависят от напряжения.Во всем частотном диапазоне, доступном в экспериментах по восстановлению каналов, спектр мощности шума является «белым», что свидетельствует о быстром обмене короной между каналом и объемным раствором. Анализируя эти данные в рамках марковской модели с двумя состояниями, мы можем количественно охарактеризовать этот процесс. Мы показываем, что время жизни коронки в канале достигает своего максимума (несколько микросекунд) примерно при том же напряжении (~ 100 мВ, отрицательное со стороны добавления белка), когда уменьшение проводимости канала коронкой наиболее выражено.Наша интерпретация заключается в том, что из-за своей жесткости коронка ощущает эффективный стерический барьер в самой узкой части поры канала. Этот барьер вместе с комплексообразованием краун-иона и возникающим в результате взаимодействием с приложенным полем приводит к поведению, обычно связанному с зависимым от напряжения связыванием в поре канала.

ВВЕДЕНИЕ

Молекулы краун-эфира можно рассматривать как циклические версии молекул линейного полиэтиленгликоля (ПЭГ). Без учета концевых групп краун-эфир (C ₂ H ₄ O) ₆ отличается от своего линейного аналога только топологией.Наши эксперименты с одиночными α -гемолизиновыми каналами, реконструированными в плоских липидных бислоях, выявили резкие различия между эффектами коронки и PEG на проводимость каналов. сравнивает влияние двух соединений на проводимость канала в 1 M водных растворах KCl при их симметричном добавлении с обеих сторон бислоя. Эффект короны на токе малых ионов через канал сильно зависит от напряжения и асимметричен, тогда как снижение проводимости, вызванное ПЭГ, лишь незначительно чувствительно к напряжению.Эффект короны увеличивается более чем в 10 раз с уменьшением положительного напряжения и демонстрирует характерный оборот при высоких отрицательных напряжениях. Таким образом, изменение топологии молекулы путем замыкания линейного ПЭГ в круг приводит к резким изменениям во влиянии молекулы на проводимость канала.

Сравнение влияния краун-эфира (C ₂ H ₄ O) ₆ (•) и полиэтиленгликоля (PEG) с молекулярной массой 200 (○) на проводимость одиночного α -гемолизиновый канал восстановлен в плоский бислой.И корону, и ПЭГ добавляли симметрично к 1 М растворам KCl с обеих сторон мембраны. В обоих случаях проводимость приведена к ее значению в чистом солевом растворе. Для облегчения сравнения применялся ПЭГ в концентрации, в пять раз превышающей концентрацию коронки.

Основное внимание в этой статье уделяется зависящему от напряжения обмену коронки между порой канала и объемным раствором, процессу, лежащему в основе эффекта коронки на проводимость. Используя экспериментально измеренные вольт-амперные зависимости и спектральные плотности мощности флуктуаций тока, мы можем извлечь параметры кинетики обмена.Мы обнаружили, что время пребывания заводной головки в канале показывает изменение оборотов в зависимости от приложенного напряжения. Предлагается объяснение поведения оборота в рамках модели диффузии со смещением напряжения, тогда как полная теория будет опубликована отдельно.

Крупные ионные каналы являются ключевыми структурными элементами обмена метаболитов между различными клеточными компартментами и между клетками (Nikaido, 2003). Понимание основных физических принципов и структурных аспектов, связанных с проницаемостью и селективностью больших каналов, все еще далеко от удовлетворительного, и наш прогресс основан на детальном знании феноменологии переноса.Эти знания могут быть получены в экспериментах с отдельными каналами, преобразованными в плоские бислои, путем изучения влияния проникновения молекул на ионный ток через канал. Регистрация проводимости с высоким разрешением и соответствующий статистический анализ позволяют количественно оценить разделение растворенного вещества и динамику внутри водных пор ионных каналов (Bayley and Martin, 2000; Безруков, 2000).

α -Гемолизин является одним из токсинов, продуцируемых Staphylococcus aureus .Способность этого белка массой 33,2 кДа образовывать каналы в плоских липидных бислоях была обнаружена более 20 лет назад (Красильников и др., 1980, 1981). Трехмерная кристаллическая структура канала теперь известна с высоким разрешением (Gouaux et al., 1994; Song et al., 1996). Согласно кристаллической структуре канал состоит из семи мономеров — результат, недавно подтвержденный в электрофизиологических экспериментах с одиночными α -гемолизиновыми каналами, реконструированными в плоские липидные бислои (Красильников и др., 2000). Также изучалась геометрия наполненного водой просвета таких реконструированных каналов и их асимметричное положение относительно плоскости мембраны (Красильников и др., 1988; Мерзляк и др., 1999). В просвете канала есть две отдельные области (). На стороне цис (которая является стороной добавления белка) канал имеет большую полость, имеющую внутренний диаметр ∼4,6 нм и в основном расположенную за пределами мембраны. В трансмембранном домене просвет канала сужается, образуя 14-цепочечный β -ствол со средним внутренним диаметром ~ 2.0 нм. Эти два домена разделены зоной перетяжки диаметром ~ 1,4 нм. α -Гемолизиновый канал признан очень многообещающим инструментом для биотехнологии (Bayley, 1995; Kasianowicz, et al., 1996; Braha et al., 1997; Gu et al., 1999, 2000; Bayley and Martin, 2000; Howorka et al., 2001; Cheley et al., 2002; Nakane et al., 2003; Meller, 2003).

Схематическое изображение протока и короны. ( A ) α -Гемолизиновый канал в присутствии краун-эфира.Стволовая часть канала представляет собой цилиндрический ствол β -листа. На карикатуре показаны относительные размеры открытого канала и комплексов корона / К ⁺ . По материалам Gu et al. (2000). ( B ) Шаровидная модель краун-эфира. CS Chem3D Pro (CambridgeSoft, Кембридж, Массачусетс) использовался для построения модели и рисования фигуры. Атомы представлены в следующей цветовой схеме: O ( черный ), H ( серый ) и C ( светло-серый ). Сферы Ван-дер-Ваальса (, пунктирные, ) показаны для двух противоположных атомов водорода.Наибольший и наименьший размеры краун-молекулы составляют 1,15 нм и 0,51 нм соответственно. Структура соответствует кристаллографическим данным (Steed, Atwood, 2000).

Здесь мы исследуем взаимодействия между каналом α -гемолизина и краун-эфиром 1,4,7,10,13,16-гексаоксациклооктана (18-краун-6), структура которого показана на рис. Исследования влияния краун-эфиров на проводимость ионных каналов важны, поскольку было показано, что суперсемейство краун-эфиров проявляет ряд фармакологических эффектов (Pressman, 1976; Brown and Foubister, 1983; Kolbeck et al., 1992; Гурбанов и др., 1993; Borrel et al., 1995). 18-краун-6 состоит из шести звеньев этиленоксида -O-CH ₂ -CH ₂ -, ковалентно связанных в макроциклическое кольцо. Если пренебречь концевыми группами линейного полиэтиленгликоля (ПЭГ), единственное различие между двумя молекулами заключается в их топологии.

Коронка не имеет ионизируемых групп и, следовательно, относится к неэлектролитам. Однако он имеет кольцо из атомов кислорода, окруженное внешним гидрофобным кольцом.Эти структурные особенности позволяют короне образовывать стабильные комплексы с ионами щелочных металлов (Pedersen, 1968, 1988; Ozutsumi, Ishiguro, 1992), в которых ион металла связывается вблизи центра кислородного кольца.

В наших предыдущих исследованиях влияния ПЭГ на проводимость канала α -гемолизина было показано, что распределение полимера определяется размером (Красильников и др., 1988, 1992; Безруков и др., 1996) и концентрацией (Красильников, Безруков , 2004) зависимый. Коэффициент распределения полимера был выведен из влияния полимеров на проводимость канала.Добавленные в одной и той же массовой концентрации полимеры разного размера снижают проводимость объемного раствора в одинаковой степени (например, Красильников, 2002; Stojilkovic et al., 2003). Однако они влияют на проводимость канала в зависимости от размера. Когда концентрации полимера не слишком высоки, полимерные спирали, которые намного больше диаметра поры канала, исключаются из поры. Они влияют на проводимость канала только в местах доступа, производя относительно небольшие эффекты (Безруков, Водяной, 1993).Полимеры, размер которых значительно меньше диаметра поры, могут свободно проникать в поры. Небольшие ПЭГ с молекулярной массой 200–300 уменьшают проводимость канала примерно в той же степени, что и проводимость объемного раствора. Их влияние на проводимость канала слабо зависит от напряжения, как показано на рис.

Напротив, мы обнаружили, что добавление короны (молекулярная масса 264) влияет на ионный ток через канал α -гемолизина явно зависимым от напряжения образом ().При изменении приложенного напряжения с -200 мВ до +200 мВ влияние коронки на проводимость канала изменяется более чем в 10 раз. Важно отметить, что эта обусловленная каналом асимметрия наблюдается при других симметричных условиях, когда коронка добавляется с обеих сторон мембраны в равных концентрациях. Влияние на проводимость не является монотонным для приложенного напряжения: для 1 M KCl оно имеет максимум при потенциалах, близких к -120 мВ.

Из вольт-амперных зависимостей и колебаний тока около установившегося значения (шум открытого канала) мы узнаем о кинетике разделения коронки в канале.Обмен коронки между порой канала и основной массой происходит настолько быстро, что спектр мощности индуцированного короной шума является «белым», то есть не зависит от частоты во всем диапазоне частот, доступном в экспериментах по восстановлению. Анализируя низкочастотную часть спектра вместе с эффектом короны на среднюю проводимость, мы можем определить время жизни короны в канале. Это время увеличивается от сотен наносекунд при положительном (со стороны цис ) напряжений до нескольких микросекунд при ∼ −100 мВ, где эффект короны на проводимость канала максимален.Дальнейшее увеличение величины отрицательного напряжения уменьшает срок службы до ∼0,5 мкм с при -200 мВ. Это говорит о том, что перемещение кроны по каналу зависит от поля (Woodhull, 1973; Hille, 1992; Тихонов, Магазинник, 1998).

Сильная зависимость эффектов короны от напряжения и ее заметная асимметрия указывают на то, что за блокировку ответственен заряженный комплекс корона / K ⁺ . Мы предполагаем, что замыкание линейной полимерной молекулы в круг влияет на ее перемещение, потому что комплекс циклической молекулы с ионом калия видит эффективный барьер в канале.Этот барьер вместе с распределением приложенного напряжения вдоль оси канала ответственен за наблюдаемую асимметричную зависимость напряжения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Дифитаноилфосфатидилхолин (DPhPC) был приобретен у Avanti Polar Lipids (Алабастр, Алабастр). Дикий тип S. aureus α -гемолизина был щедрым подарком доктора Хагана Бейли (Техасский университет A&M). Краун-эфир 1,4,7,10,13,16-гексаоксациклооктан (18-краун-6) был приобретен у Sigma-Aldrich (Аллентаун, Пенсильвания).Остальные химические вещества были аналитической чистоты.

Двухслойные липидные мембраны были сформированы при комнатной температуре 23 ± 2 ° C с использованием метода противодействия липидному монослою из 10 мг / мл растворов DPhPC в пентане на отверстии диаметром 70- мкм мкм в диапазоне 15- мкм мкм. -толстая тефлоновая перегородка, как описано ранее (например, Красильников и Безруков, 2004 г. после Монталь и Мюллер, 1972 г.). Полная емкость составляла 90–100 пФ, емкость пленки близка к 50 пФ. Мембранный потенциал поддерживали с помощью электродов Ag / AgCl в 3 M KCl, 2% агарозных мостиках, собранных в стандартных наконечниках пипеток на 200- мкм л.

Эксперименты проводились с усилителем Axopatch 200B (Axon Instruments, Фостер-Сити, Калифорния) в режиме фиксации напряжения. Токи фильтровались восьмиполюсным фильтром Баттерворта нижних частот (модель 9002, Frequency Devices, Хаверхилл, Массачусетс) на частоте 15 кГц и одновременно записывались кассетным видеомагнитофоном, работающим в цифровом режиме, и напрямую сохранялись в памяти компьютера с дискретизацией. частота 50 кГц. Анализ амплитуды и спектра мощности шума проводился с использованием программного обеспечения, разработанного компанией.

Небольшие количества α -гемолизина из разбавленного исходного раствора с концентрацией 50 μ г / мл добавляли к цис -стороне камеры. Конечная концентрация белка в растворе для смывания мембран составляла ~ 100 пМ. Если не указано иное, стандартный раствор для смывания мембран, использованный в экспериментах с двухслойным покрытием, содержал 1 М KCl и 5 мМ Трис с pH, доведенным до 7,5 с помощью лимонной кислоты. Потенциал определяется как положительный, если он выше на стороне добавления белка.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ

Проводимость отдельных каналов α -гемолизина показывает определенную дисперсию от канала к каналу (например, Красильников и др., 1988; Красильников, Безруков, 2004). Например, при 23 ° C в 1 М растворах KCl при -40 мВ и нейтральном pH оно составляет 960 ± 70 пСм. Таким образом, чтобы измерить изменения проводимости с соответствующей точностью, эффект коронки в каждом эксперименте оценивался путем сравнения проводимости одного и того же единственного канала в растворах без коронки и содержащих коронку.

показывает ток через единственный канал до и после симметричного добавления коронки до концентрации 10 мМ в растворах для ванн с мембраной с обеих сторон мембраны. Есть два эффекта, вызванных коронкой: уменьшение среднего тока и увеличение токового шума. Оба эффекта сильно зависят от приложенного напряжения. Они значительно больше при отрицательном знаке приложенного напряжения. Кроме того, эффекты зависят от концентрации соли.

Ионные токи через единственный канал α -гемолизина, измененные присутствием 10 мМ краун-эфира.Записи были взяты из одного и того же канала до и после добавления коронки в 1 М буферный раствор KCl. В момент времени нулевой потенциал был переключен с 0 на -100 мВ. Обратите внимание, что при наличии короны средний ток уменьшается, а токовый шум растет. Текущие записи фильтруются путем усреднения с интервалами 0,5 мс. На вставках текущие записи показаны в четырехкратном увеличенном масштабе.

демонстрирует зависимость проводимости канала от напряжения для нескольких коронных концентраций.Самая верхняя кривая показывает, что даже при отсутствии коронки канал не омический — его проводимость зависит от приложенного напряжения. Чтобы эффект добавления коронки был виден более четко, дает отношение проводимости канала в присутствии коронки к проводимости в растворе без коронки. Уменьшение проводимости, вызванное коронкой, немонотонно по приложенному напряжению. В 1 M растворах KCl эффект короны достигает максимума около -120 мВ.

Влияние коронки на одноканальную ионную проводимость сильно зависит от напряжения.( A ) Проводимость канала в 1 M растворах KCl при различных краун-концентрациях (см. Вставку). ( B ) Те же данные отображены как отношение проводимости канала в присутствии коронки к проводимости в растворе без коронки. Приложение отрицательного напряжения (отрицательное со стороны цис ; см.) Способствует снижению проводимости, индуцированной короной. Эффект короны насыщается с концентрацией короны — инкремент снижения проводимости меньше на шаге концентрации 50-60 мМ, чем на шаге 0-10 мМ.

Зависимость снижения проводимости, вызванного краун-индуцированием, от концентрации KCl иллюстрируется результатами, представленными на рис. Отношение проводимости канала к ее значению в отсутствие коронки при напряжениях, соответствующих максимуму корон-индуцированного эффекта в растворах с различной концентрацией KCl, показано в как функция коронной концентрации. Видно, что эффект короны на проводимость канала увеличивается при увеличении концентрации соли. Этот результат может указывать на усиление гидрофобного взаимодействия между короной и каналом — явление, описанное ранее для полиэтиленгликоля (Безруков и др., 1996; Мерзляк и др., 1999).

Краун-эффекты на проводимость канала при различных концентрациях соли. ( A ) Отношения проводимости канала в присутствии короны (при напряжениях, соответствующих максимальному эффекту; см.) К проводимости в растворах без короны при различных концентрациях солей (данные показаны разными символами, как поясняется в вставка). Пунктирные линии демонстрируют влияние короны на проводимость канала как линейную экстраполяцию от малых концентраций короны.Сплошные линии показывают соответствие данных проводимости канала изотерме связывания первого порядка. Точки данных представляют собой средние значения по крайней мере по трем экспериментам для напряжений, соответствующих максимуму эффекта, индуцированного короной. ( B ) Напряжение, при котором достигается максимум индуцированного короной эффекта на проводимость канала (см.) В растворах KCl, содержащих 10 мМ коронки, в зависимости от концентрации соли.

показывает, как оптимальный максимальный эффект зависит от концентрации соли в 10-мМ краун-растворах.По мере увеличения концентрации соли максимальное влияние коронки на проводимость канала достигается при меньших (по величине) отрицательных напряжениях. Идентичные зависимости от концентрации соли были обнаружены и при других краун-концентрациях.

Уменьшение среднего ионного тока в канале, вызванное коронкой, сопровождается генерацией избыточного шума (). дает спектральную плотность мощности тока в присутствии 10 мМ короны при приложенном потенциале -100 мВ ( верхняя кривая ) по сравнению с фоном, измеренным при 0 мВ ( нижняя кривая ).Равновесный шум одиночного канала с относительно высокой проводимостью (~ 1 нСм в 1 M KCl) вносит значительный вклад в уровень фонового шума (Красильников, Безруков, 2004). Однако в частном случае нижней кривой большая часть шума исходит от резистора обратной связи усилителя. Растущая часть спектра мощности связана с конечным сопротивлением электрода и электролита, шумом усилителя, а также емкостью мембраны и пленки (Sigworth, 1995). Средняя кривая показывает шум канала при -100 мВ в решении без короны.Он значительно превышает шум равновесного канала из-за модуляции проводимости канала флуктуирующими зарядами ионизируемых остатков (Безруков и Касьянович, 1993; Касьянович и Безруков, 1995). Резкое уменьшение, наблюдаемое во всех трех спектрах на частотах> 10 000 Гц, связано с фильтрацией сигнала сглаживания (Материалы и методы).

Спектральная плотность мощности токового шума одиночного открытого α -гемолизинового канала в присутствии 10 мМ коронки при 0 ( нижняя кривая ) и при -100 мВ ( верхняя кривая ) и без коронки 1 M растворы KCl при −100 мВ ( средняя кривая ).

показывает, что спектр шума, индуцированного короной, является «белым» (не зависит от частоты) до частот ∼10 кГц. Отсутствие дисперсии на этих частотах означает, что процесс обмена короной между порой канала и объемом происходит быстро в том смысле, что характерное время релаксации намного меньше, чем величина, обратная наибольшей частоте в диапазоне измерения, 1/2 πf _max ≈ 20 μ с. По этой причине мы строим наш анализ на низкочастотной спектральной плотности, изученной как функция приложенного напряжения при различных коронных концентрациях.

сравнивает результаты измерений шума и проводимости при малых коронных концентрациях, полученные в 1 M KCl ( A и B ) с результатами в 4 M KCl ( C и D ). Низкочастотная спектральная плотность рассчитывалась как среднее значение между частотами 100 Гц < f <1000 Гц с вычитанием фона. Видно, что как уменьшение проводимости, так и избыточный шум намного сильнее при более высокой концентрации соли.

Низкочастотная спектральная плотность мощности зависящего от напряжения токового шума ( A ) и проводимость канала ( B ) в 1 M KCl при различных коронных концентрациях в зависимости от приложенного напряжения. Эффект короны намного сильнее в 4 M KCl ( C и D ).

ОБСУЖДЕНИЕ

Анализ шума обычно включает определение «угловой частоты», которая непосредственно связывает спектр шума с характерным временем системы (Conti and Wanke, 1975; Neher and Stevens, 1977; DeFelice, 1981).В рассматриваемом здесь случае эта частота недостижима. показывает, что в диапазоне доступных частот спектр белый. Используя альтернативный язык, экспериментальные точки, вносящие вклад в дорожку шума, не коррелированы во времени (за исключением корреляций, вносимых фильтром сглаживания). Анализ таких наборов данных представляет собой особую задачу (например, Boguna et al., 2001).

В принципе, белая часть спектра позволяет оценить подвижность частицы в канале, используя концепцию «молекулярного счета Коултера» (Безруков и др., 1994; Ростовцева, Безруков, 1998; Безруков, 2000). Однако в практически важных случаях неоднородных пор, как в данной работе (), этот подход дает только оценку порядка величины. В отличие от молекул АТФ в канале VDAC (Ростовцева и Безруков, 1998), формальное применение этого подхода к результатам, показанным в, дает зависящие от напряжения значения для подвижности короны в канале. При изменении приложенного напряжения от -200 мВ до +200 мВ расчетный эффективный коэффициент диффузии изменяется в ~ 10 раз, оставаясь на два-один порядок меньше, чем его объемное значение, равное 4.8 × 10 ⁻¹⁰ м ² с ⁻¹ (Юлдашева и др., 2003).

Модель с двумя состояниями

В данной статье низкочастотная часть спектра шума используется для определения кинетических параметров обмена короной между каналом и массивом в рамках модели с двумя состояниями. Эта модель использовалась ранее для оценки времени жизни молекул ПЭГ в каналах аламетицина (Безруков, Водяной, 1993). Модель предполагает, что эффект блокировки на проводимость канала может быть описан как марковский процесс с двумя состояниями.Начнем с исходной формулы Махлупа для спектральной плотности мощности такого процесса (Machlup, 1954). В нашем случае это можно записать в виде:

(1)

, где f — частота, — средний срок службы канала в состоянии блокировки коронки, — среднее время между последовательными блокировками, — изменение в токе, вызванном событием блокировки одной молекулы, — время релаксации. Вероятность блокировки в этой модели определяется как

(2)

Согласно формулам.Время 1 и 2 можно записать как

(3)

, где обозначает низкочастотный предел спектральной плотности мощности. В рамках модели уменьшение среднего ионного тока через канал связано с вероятностью блокировки следующим образом:

(4)

Таким образом, среднее время жизни состояния с коронной блокировкой равно

( 5)

и измеряются непосредственно в эксперименте. Единственный неопределенный параметр, который требуется найти, — это амплитуда падения тока при элементарной блокировке. В принципе, этот параметр можно найти, измерив среднее снижение тока в пределе высоких коронных концентраций, где стремится к нулю и вероятность блокировки, приведенной в формуле.2 приближается к единству. Например, экстраполяция кривой 1 M KCl на бесконечные коронные концентрации дает значение ∼0,4 для относительного снижения тока, где I — ионный ток через канал в бескоронковом растворе. В 4 М растворах KCl это число близко к 0,65.

Однако можно было ожидать, что при высоких концентрациях крауна в процесс блокирования вовлечено более одной краун-молекулы. Если это так, наша модель двух государств не работает. Имея это в виду, мы решили оставить его как регулируемый параметр.Для 4 M KCl мы рассчитали время жизни коронки в канале с помощью уравнения. 5 с использованием результатов измерений шума и проводимости, полученных для одного и того же канала при малых коронных концентрациях 2, 4 и 8 мМ (). Время жизни набора данных при -80 мВ, рассчитанное для различных значений параметра, представлено в. Видно, что они действительно чувствительны к выбору этого параметра. В то же время в рамках принятой модели время жизни коронки в канале не должно зависеть от концентрации коронки.Руководствуясь этим критерием, мы находим, что лучший выбор для значения отношения — 0,55 (). Этот анализ был повторен при нескольких отрицательных напряжениях из диапазона -200 мВ < В <-40 мВ. Было обнаружено, что соотношение не зависит от напряжения в пределах точности измерений,

Срок службы кроны по данным 4 M KCl при -80 мВ для концентраций кроны 2 мМ, 4 мМ и 8 мМ, рассчитанных в соответствии с формулой. 5 для различных значений регулируемого параметра

С помощью этой процедуры регулируемый параметр также был найден для других концентраций соли.Результаты следующие: при 1 М KCl и 2 М KCl. Вместе с 0,55, найденным для 4 M KCl, эти значения удовлетворительно согласуются со значениями, определенными из данных зависимости проводимости от коронной концентрации (), хотя они систематически меньше. Подгоняя данные к простой изотерме связывания и экстраполируя на бесконечную краун-концентрацию, мы находим примерно на 20% более высокие оценки для этого систематического отклонения, что предполагает, что при высоких краун-концентрациях вторая краун-молекула участвует в закупорке канала.Однако при относительно небольших концентрациях в короне (≤8 мМ), использованных в нашем анализе шума, блокировка хорошо описывается нашей простой марковской моделью с двумя состояниями.

Зная параметр, мы можем теперь рассчитать время пребывания коронки в канале по формуле. 5 и проанализируем его зависимость от приложенного напряжения. Результаты для 2-, 4- и 8-мМ краун-концентраций в 4 М KCl показаны на рис. Видно, что три кривые близки друг к другу. Отклонения между точками находятся в пределах ожидаемых комбинированных ошибок измерения шума и проводимости.Хорошее совпадение трех кривых указывает на непротиворечивость нашего анализа экспериментальных данных на основе модели двух состояний.

Кинетические параметры закупорки коронки поры α -гемолизина в зависимости от приложенного напряжения. ( A ) Время жизни коронки в канале в 4 M растворах KCl при различных концентрациях коронки в зависимости от приложенного трансмембранного напряжения. Регулируемый параметр в формуле. 5 выбрано как = 0,55. ( B ) Константа скорости связывания короны ( k _на ), рассчитанная для 2, 4 и 8 мМ коронки в 4 M растворе для смывания с мембраной KCl.Пунктирная кривая представляет собой регрессию первого порядка для данных.

Самая интересная особенность зависимости времени пребывания от напряжения, показанная на рисунке, — это оборот. Время жизни коронки в канале достигает максимального значения 3,3 мкм с при от -60 до -80 мВ. Аналогичное поведение было обнаружено в 1 и 2 М растворах KCl (данные не представлены). Оказывается, максимальное время пребывания уменьшается при более низких концентрациях соли. Напряжения, соответствующие максимумам, смещаются в сторону более отрицательных значений.Максимальное время пребывания в 1 М KCl примерно в два раза меньше, чем в 4 М растворе KCl.

Шум, вызванный коронкой, и снижение проводимости позволяют нам определить еще один важный параметр: среднее время между последовательными креплениями коронки, Из уравнения. 2 следует, что

(6)

, где вероятность блокировки p , заданная в уравнении. 4, можно легко определить, если известен параметр. Затем можно рассчитать постоянную скорости: Ее зависимость от напряжения в 4 M растворах KCl показана на рис.Видно, что постоянная скорости увеличивается с отрицательной величиной напряжения. Таким образом, наш анализ низкочастотной белой части спектра шума позволяет определить оба кинетических параметра модели с двумя состояниями.

Изменение времени пребывания в канале

Одним из наиболее интересных результатов нашего анализа является изменение среднего времени пребывания коронки в канале в зависимости от приложенного напряжения (). Чтобы рационализировать такое поведение, мы должны выйти за рамки нашей модели с двумя состояниями и рассмотреть детальную динамику короны в канале при наличии внешнего напряжения.Реалистичный анализ такой динамики требует не только точной структурной информации о поре канала, но и знания распределения электрического поля в канале, включая поля от зарядов на порообразующих молекулах белка. Вместо этого мы предлагаем одномерную модель диффузии, которая отражает наиболее важные качественные особенности явления. Модель предсказывает изменение среднего срока службы коронки в канале.

При оценке среднего времени жизни принимаем во внимание тот факт, что коронка образует положительно заряженный комплекс с ионом K ⁺ .Исходя из геометрии канала (), разумно предположить, что комплекс снижает проводимость канала, в основном, когда он расположен в узкой части поры. Время нахождения комплекса в этой части очень чувствительно к знаку приложенного напряжения. Отрицательные напряжения втягивают комплекс в канал со стороны trans . Чтобы пересечь канал, комплекс должен пройти через зону сужения, которая образует почти непроницаемый барьер для комплекса при умеренных напряжениях.Чтобы выйти с той же стороны, с которой вошел комплекс, он должен диффундировать против движущей силы, создаваемой приложенным напряжением. Таким образом, комплекс эффективно захватывается в зоне сужения. Однако при достаточно высоких напряжениях комплексы проходят через зону сжатия и перемещаются. Оборачиваемость среднего срока службы определяется конкуренцией между двумя сценариями.

Иная ситуация при положительном напряжении. Поскольку преддверие поры на стороне цис является широким, снижение проводимости, вызванное комплексом, невелико.Кроме того, в основном напряжение падает в узкой части канала. Как следствие, индуцированная напряжением потенциальная яма для комплекса в вестибюле на стороне цис является относительно неглубокой, так что время жизни комплекса в такой лунке невелико. Эти аргументы подтверждаются результатами, полученными при сложении асимметричной коронки (данные не показаны). При отрицательных напряжениях, в пределах точности наших измерений, эффект добавления коронки только на trans -стороне мембраны был таким же, как и при симметричном добавлении.При положительном напряжении влияние добавки цис было измеримым, но небольшим. При +200 мВ 50 мМ коронки в 1 М растворах KCl снижали проводимость канала на ~ 5%.

Разработана теория, описывающая динамику комплекса в узкой части канала в рамках одномерной диффузионной модели. Для непроницаемых барьеров наша теория предсказывает только монотонное уменьшение комплексного времени жизни в канале с увеличением напряжения, тогда как для проницаемых барьеров теория предсказывает оборотное поведение.В случае непроницаемых барьеров и высоких отрицательных напряжений, где e — это заряд комплекса, а k и T — постоянная Больцмана и абсолютная температура, средний срок службы равен

(7)

Здесь l — расстояние между отверстием канала и зоной сужения, а V — падение напряжения на этом расстоянии. Подставив l = 5 нм (половина длины канала;), D = 4.8 × 10 ⁻¹⁰ м ² s ⁻¹ (Юлдашева и др., 2003) и V ≈ −100 мВ, что всего на порядок меньше экспериментального значения при это напряжение, близкое к критическому. В этой оценке мы использовали объемное значение комплексного коэффициента диффузии. Однако в действительности частица, размер которой сравним с размером отверстия поры, может сильно замедляться из-за взаимодействия со стенками поры. Если учесть эту «ограниченную диффузию» (Бин, 1972; Безруков, 2000), используя меньшее значение коэффициента диффузии, оценка в формуле.7 приближается к экспериментальному значению. Увеличение времени пребывания с увеличением концентрации соли может быть связано с усилением взаимодействия короны с остатками выстилающего поры белка, аналогично солевым взаимодействиям PEG-белок (Timasheff, 1993).

В нескольких недавних исследованиях канала α -гемолизина (Sanchez-Quesada et al., 2000; Cheley et al., 2002; Gu et al., 2003) было высказано предположение, что разные молекулы, как нейтральные, так и заряженные , могут связываться в поре канала вблизи зоны сужения.Наша теория предлагает альтернативу. В нашей модели диффузии под напряжением, «место связывания» эффективно создается стерическим сужением и внешним электрическим полем, которое заставляет комплекс противодействовать сужению.

ЗАКЛЮЧИТЕЛЬНЫЕ ЗАМЕЧАНИЯ

Эта статья посвящена влиянию краун-эфира (C ₂ H ₄ O) ₆ на ионную проводимость отдельных каналов α -гемолизина, реконструированных в плоские липидные бислои. Измеряя снижение проводимости канала и спектральную плотность мощности флуктуаций тока, вызванных коронкой, мы анализируем, как эффект зависит от приложенного напряжения и концентрации коронки и соли.Мы обнаружили, что эффективность блокировки коронки сильно зависит как от знака, так и от величины приложенного напряжения и увеличивается при более высоких концентрациях соли.

Чтобы рационализировать наши экспериментальные результаты, мы предполагаем, что канал имеет два состояния проводимости: открытое состояние и частично заблокированное состояние, в котором ток через канал уменьшается из-за наличия коронки. Мы дополнительно предполагаем, что переходы между двумя состояниями являются марковскими. Исходя из этих предположений, мы определили все параметры модели из экспериментальных данных и проанализировали их зависимость от напряжения.Одним из наиболее интересных результатов нашего анализа является зависимость среднего времени пребывания коронки в канале от приложенного напряжения, которая является немонотонной и имеет максимум около 100 мВ.

Мы предполагаем, что это поведение можно объяснить с помощью модели, которая рассматривает сложную динамику в поре с точки зрения одномерной диффузии под напряжением. Изменение времени пребывания является следствием конкуренции двух тенденций: фиксации коронки под действием напряжения в зоне сужения и зависящего от напряжения прохождения коронки через нее.Действительно, корона образует комплекс с положительными ионами. Отрицательные напряжения загоняют комплекс со стороны trans в узкую часть поры канала. Комплекс достигает зоны сужения (), где застревает, поскольку эта часть поры для него практически непроницаема. Находясь в зоне сужения, комплекс частично перекрывает канал. При не слишком высоких отрицательных напряжениях комплекс не проходит через сужение, а в основном выходит из канала, движущегося против электрического поля.Вот почему его время жизни в канале увеличивается с ростом отрицательного напряжения. Однако при достаточно высоких напряжениях комплекс проходит через зону сужения, и время жизни комплекса в канале начинает уменьшаться с увеличением величины напряжения. Диффузионная модель зависящей от напряжения блокировки будет подробно рассмотрена в другом месте.

Краун-эфиры, по-видимому, являются многообещающим инструментом для исследования мембранного транспорта с облегчением каналов. В то же время многие аспекты динамики короны в канале остаются неясными.Список включает взаимодействие краун-комплекса с порообразующим белком, распределение электрического поля вдоль канала, гидратацию комплекса внутри канала и эффект изменения гидратации на входе в канал. Дальнейшие исследования этих аспектов помогут нам лучше понять феномен и могут оказаться полезными для объяснения фармакологических эффектов суперсемейства краун-эфиров на молекулярном уровне.

Благодарности

Мы благодарим Адриана Парсегияна и Дэниела Харриза за плодотворные обсуждения.

Это исследование было частично поддержано Conselho National de Desenvolvimento Cientifico e Tecnologico (Бразилия).

Ссылки

• Бейли, Х. 1995. Порообразующие белки со встроенными триггерами и переключателями. Биоорг. Chem. 23: 340–354. [Google Scholar]
• Bayley, H., and C.R. Martin. 2000. Резистивно-импульсное зондирование: от микробов до молекул. Chem. Ред. 100: 2575–2594. [PubMed] [Google Scholar]
• Бин, К. П. 1972. Физика пористых мембран — нейтральные поры. в мембранах. Г. Эйзенман, редактор. Марсель Деккер, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк. 1–54. [PubMed]
• Безруков, С. М. 2000. Ионные каналы как молекулярные счетчики Коултера для исследования транспорта метаболитов. J. Membr. Биол. 174: 1–13. [PubMed] [Google Scholar]
• Безруков, С. М., и Дж. Дж. Касьянович. 1993. Текущий шум показывает кинетику протонирования и количество ионизируемых центров в открытом ионном канале белка. Phys. Rev. Lett. 70: 2352–2355. [PubMed] [Google Scholar]
• Безруков, С.М., Водяной И.И. 1993. Исследование каналов аламетицина водорастворимыми полимерами. Влияние на проводимость состояний канала. Биофиз. J. 64: 16–25. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Безруков, С. М., И. Водяной, Р. А. Брутян, Дж. Дж. Касьянович. 1996. Динамика и свободная энергия распределения полимеров в пору нанометрового размера. Макромолекулы. 29: 8517–8522. [Google Scholar]
• Безруков С.М., Водяной И., Парсегян В.А. 1994. Подсчет полимеров, движущихся по единственному ионному каналу.Природа. 370: 279–281. [PubMed] [Google Scholar]
• Богуна, М., Л. Кулман, С. М. Безруков, А. М. Бережковский, Г. Х. Вайс. 2001. Константы скорости из некоррелированных данных по одиночным молекулам. J. Phys. Chem. 105: 6246–6250. [Google Scholar]
• Боррель, М. Н., М. Фиалло, И. Вереш и А. Гарниер-Сюйеро. 1995. Влияние краун-эфиров, солей тетраалкиламмония и полиоксиэтиленамфифилов на включение пирарубицина в устойчивые к K526 клетки. Biochem. Pharmacol. 50: 2069–2076.[PubMed] [Google Scholar]
• Браха, О., Б. Уокер, С. Чели, Дж. Дж. Касьянович, Л. Сонг, Дж. Э. Гуо и Х. Бейли. 1997. Разработаны белковые поры как компоненты биосенсоров. Chem. Биол. 4: 497–505. [PubMed] [Google Scholar]
• Браун, Г. Р. и А. Дж. Фубистер. 1983. Антикокцидиальная активность краун-полиэфиров. J. Med. Chem. 26: 590–592. [PubMed] [Google Scholar]
• Cheley, S., L.Q. Gu, and H. Bayley. 2002. Стохастическое зондирование наномолярного инозитол-1,4,5-трифосфата с созданной порами.Chem. Биол. 9: 829–838. [PubMed] [Google Scholar]
• Конти, Ф. и Э. Ванке. 1975. Канальный шум в нервных мембранах и липидных бислоях. Кварта. Rev. Biophys. 8: 451–506. [PubMed] [Google Scholar]
• ДеФеличе, Л. Дж. 1981. Введение в мембранный шум. Plenum Press, Нью-Йорк, Нью-Йорк.
• Gouaux, J. E., O. Braha, M. R. Hobaugh, L. Song, S. Cheley, C. Shustak и H. Bayley. 1994. Субъединичная стехиометрия стафилококкового альфа-гемолизина в кристаллах и на мембранах: гептамерная трансмембранная пора.Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 91: 12828–12831. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Гу, Л. К., О. Браха, С. Конлан, С. Чели и Х. Бейли. 1999. Стохастическое зондирование органических аналитов порообразующим белком, содержащим молекулярный адаптер. Природа. 398: 686–690. [PubMed] [Google Scholar]
• Гу, Л. К., С. Чели и Х. Бейли. 2003. Электроосмотическое усиление связывания нейтральной молекулы с трансмембранной порой. Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 100: 15498–15503. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Gu, L.К., М. Далла Серра, Дж. Б. Винсент, Г. Вай, С. Чели, О. Браха и Х. Бэйли. 2000. Изменение зарядовой селективности в порах трансмембранного белка с помощью нековалентных молекулярных адаптеров. Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 97: 3959–3964. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Гурбанов, К. Г., А. А. Паперно, Н. Г. Лукьяненко, С. С. Басок. 1993. Антиишемические свойства производных краун-эфира. Эксп. Клин. Фармакол. 56: 18–21. [PubMed] [Google Scholar]
• Hille, B.1992. Ионные каналы возбудимых мембран, 2-е изд. Sinauer Associates, Сандерленд, Великобритания.
• Ховорка С., С. Чели и Х. Бейли. 2001. Обнаружение конкретных последовательностей отдельных цепей ДНК с использованием сконструированных нанопор. Nature Biotechnol. 19: 636–639. [PubMed] [Google Scholar]
• Kasianowicz, J. J., and S. M. Bezrukov. 1995. Динамика протонирования ионного канала α -токсина из спектрального анализа pH-зависимых флуктуаций тока. Биофиз. J. 69: 94–105. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Kasianowicz, J.Дж., Э. Брандин, Д. Брантон и Д. В. Димер. 1996. Характеристика отдельных полинуклеотидных молекул с использованием мембранного канала. Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 93: 13770–13773. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Кольбек, Р. К., К. Ла Нев, А. Аквир, Т. М. Носек и К. Х. Паннелл. 1992. Инотрофическое влияние макроциклических полиэфиров на гладкую мускулатуру трахеи. Pharmacol. Biochem. Behav. 42: 645–650. [PubMed] [Google Scholar]
• Красильников О.В. 2002. Калибровка каналов полимерами. В Структура и динамика ограниченных полимеров. J. J. Kasianowicz, M. S. Z. Kellermayer и D. W. Deamer, редакторы. Kluwer Publishers, Дордрехт, Нидерланды. 97–115.
• Красильников О.В., Безруков С.М. 2004. Разделение полимеров из неидеальных растворов на белковые пустоты. Макромолекулы. 37: 2650–2657. [Google Scholar]
• Красильников О.В., Мерзляк П.Г., Юлдашева Л.Н., Родригес С.Г., Бхакди С. и Валева А. 2000. Электрофизиологические доказательства гептамерной стехиометрии ионных каналов, образованных альфа-токсином Staphylococcus aureus в плоских липидных бислоях.Мол. Microbiol. 37: 1372–1378. [PubMed] [Google Scholar]
• Красильников, О. В., Р. З. Сабиров, В. И. Терновский, П. Г. Мерзляк, Дж. Н. Муратходжаев. 1992. Простой метод определения радиуса пор ионных каналов в плоских двухслойных липидных мембранах. FEMS Microbiol. Иммунол. 5: 93–100. [PubMed] [Google Scholar]
• Красильников, О. В., Р. З. Сабиров, В. И. Терновский, П. Г. Мерзляк, Б. А. Ташмухамедов. 1988. Структура ионного канала, индуцированного альфа-токсином Staphylococcus aureus.Gen. Physiol. Биофиз. 7: 467–473. [PubMed] [Google Scholar]
• Красильников О.В., Терновский В.И., Ю. М. Мусаев, Б. А. Ташмухамедов. 1980. Влияние стафилотоксина на проводимость двухслойных фосфолипидных мембран. Докл. Акад. Наук УзССР. №7: 66–68. [Google Scholar]
• Красильников О.В., Терновский В.И., Ташмухамедов Б.А. 1981. Свойства каналов проводимости, индуцированных в фосфолипидных двухслойных мембранах альфа-стафилотоксином. Биофизика. 26: 271–276.[PubMed] [Google Scholar]
• Machlup, S. 1954. Шум в полупроводниках: спектр двухпараметрического случайного сигнала. J. Appl. Phys. 25: 341–343. [Google Scholar]
• Меллер А. 2003. Динамика транспорта полинуклеотидов через поры нанометрового масштаба. J. Phys. Конденс. Иметь значение. 15: R581 – R607. [Google Scholar]
• Мерзляк П.Г., Л.Н. Юлдашева, К.Г. Родригес, К.М.М. Карнейро, О.В. Красильников и С.М. Безруков. 1999. Полимерные неэлектролиты для исследования геометрии пор: приложение к трансмембранному каналу альфа-токсина.Биофиз. J. 77: 3023–3033. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Montal, M. и P. Mueller. 1972. Формирование бимолекулярных мембран из липидных монослоев и изучение их электрических свойств. Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 69: 3561–3566. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Накане, Дж. Дж., М. Акесон и А. Марциали. 2003. Сенсоры Nanopore для анализа нуклеиновых кислот. J. Phys. Конденс. Иметь значение. 15: R1365 – R1393. [Google Scholar]
• Neher, E., and C.F.Стивенс. 1977. Колебания проводимости и ионные поры в мембранах. Анну. Rev. Biophys. Bioeng. 6: 345–381. [PubMed] [Google Scholar]
• Никайдо, Х. 2003. Пересмотр молекулярных основ проницаемости бактериальной внешней мембраны. Microbiol. Мол. Биол. Откровение 67: 593–656. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Озуцуми К. и С. И. Исигуро. 1992. Точное калориметрическое исследование комплексов 18-краун-6 с ионами натрия, калия, рубидия, цезия и аммония в водном растворе.Бык. Chem. Soc. Jpn. 65: 1173–1175. [Google Scholar]
• Педерсен, К. Дж. 1968. Ионные комплексы макроциклических простых полиэфиров. Кормили. Proc. 27: 1305–1309. [PubMed] [Google Scholar]
• Педерсен, К. Дж. 1988. Открытие краун-эфиров. Наука. 241: 536–540. [PubMed] [Google Scholar]
• Прессман, Б. С. 1976. Биологические применения ионофоров. Анну. Rev. Biochem. 45: 501–530. [PubMed] [Google Scholar]
• Ростовцева Т. К., Безруков С. М.. 1998. Транспорт АТФ через единственный митохондриальный канал, VDAC, изучен с помощью текущего анализа колебаний.Биофиз. J. 74: 2365–2373. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Санчес-Кесада, Дж., М. Р. Гадири, Х. Бейли и О. Браха. 2000. Циклические пептиды как молекулярные адаптеры для порообразующего белка. Варенье. Chem. Soc. 122: 11757–11766. [Google Scholar]
• Сигворт, Ф. Дж. 1995. Электронная конструкция зажима. В одноканальной записи , 2-е изд. Редакторы Б. Сакманн и Э. Неер. Plenum Press, Нью-Йорк, Нью-Йорк. 95–127.
• Сонг, Л., М. Р. Хобо, К.Шустак, С. Чели, Х. Бейли и Ж. Э. Гуо. 1996. Структура стафилококкового α -гемолизина, гептамерной трансмембранной поры. Наука. 274: 1859–1866. [PubMed] [Google Scholar]
• Стид, Дж. У. и Дж. Л. Этвуд. 2000. Супрамолекулярная химия: Введение. Джон Вили, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк.
• Стоилкович, К.С., Бережковский А.М., В.Ю. Зицерман, С.М. Безруков. 2003. Электропроводность и микровязкость растворов электролитов, содержащих полиэтиленгликоли.J. Chem. Phys. 119: 6973–6978. [Google Scholar]
• Тихонов Д. Б., Магазинаник Л. Г.. 1998. Зависимость от напряжения блокировки открытого канала: скорость начала и смещения. J. Membr. Биол. 161: 1–8. [PubMed] [Google Scholar]
• Тимашев, С. Н. 1993. Контроль стабильности и ассоциации белков с помощью слабого взаимодействия с водой: как растворители влияют на эти процессы? Анну. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 22: 67–97. [PubMed] [Google Scholar]
• Woodhull, A. M. 1973. Ионная блокада натриевых каналов в нерве.J. Gen. Physiol. 61: 687–708. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Юлдашева, Л. Н., Ф. Халлвасс, С. М. да Круз Гонсалвес, А. М. Симас и О. В. Красильников. 2003. Влияние анионов на комплексообразование 18-краун-6 и иона натрия в водных растворах. J. Mol. Liq. 106: 31–41. [Google Scholar]

Отслеживание восстановления иммунной системы Т-клеток после трансплантации истощенных по TCRαβ / CD19 гемопоэтических клеток детям

CSREES Школа природных ресурсов Комплексный пятилетний обзор

% PDF-1.7 % 1 0 объект > эндобдж 2 0 obj > поток 2017-07-02T03: 57: 04-07: 002017-07-02T03: 57: 04-07: 002017-07-02T03: 57: 04-07: 00Appligent AppendPDF Pro 5.5uuid: 3a2d3d5b-a627-11b2-0a00- 782dad000000uuid: 3a2dbb75-a627-11b2-0a00-b035f19dfd7fapplication / pdf

EIL 5.7 Россия Контекст — превосходство в литературе Дженис Кэмпбелл

Русская литература Толстого, Достоевского, Пушкина, Чехова и др.

Учебное пособие: Мировая литература (Отличник литературы, английский 5)

Почести Текст: Братья Карамазовы ИЛИ Преступление и наказание Федор Достоевский ИЛИ Архипелаг ГУЛАГ Александр Солженицын

EIL 5.7 Ресурсы контекста

Эти ссылки представляют собой только онлайн-ресурсы, упомянутые в этом модуле. Инструкции, справочная информация, автономные ресурсы и задания можно найти в указанном выше учебном пособии «Совершенство в литературе».

Чтений

Введение профессора Пола Брайана в русскую литературу XIX века

http://www.wwnorton.com/college/english/worldlit2e/short/ch/19/summaries.aspx

http://www.academia.edu/20243165/Dostoevsky_Study_and_Reading_Guide

http://digitalcommons.liberty.edu/cgi/viewcontent.cgi?article=1190&context=gov_fac_pubs

https://www.firstthings.com/article/2002/12/ivan-karamazovs-mistake

Жизнь автора

https: // литература передового опыта.com / pushkin-biography /

https://excellence-in-literature.com/chekhov-biography/

См. Также автономные ресурсы в учебном пособии.

Поэзия

http: //www.poetryloverspage.com / poets / pushkin / pushkin_ind.html

http://www.uvm.edu/~sgutman/Akhmatova.htm

https://sites.google.com/site/poetryandtranslations/anna-akhmatova

Рассказ

Аудио

Братья Карамазовы

http: // librivox.org

Музыка

https://www.metopera.org/user-information/synopses-archive/eugene-onegin

http://en.wikipedia.org/wiki/Tchaikovsky_and_the_Five

http://www.favorite-classical-composers.com/tchaikovsky-music.html

Видео